钝齿棒杆菌CD945丙酮酸羧化酶基因的克隆、序列分析及表达的研究

• 作 者: 王绛
• 机 构: 中国科学院微生物研究所
• 出 处: 中国科学院微生物研究所
• 发表日期: 2002年期
• 关键词: 钝齿棒杆菌 赖氨酸 丙酮酸羧化酶 天冬氨酸激酶 基因克隆

丙酮酸羧化酶（PYC,EC 6.4.1.1）是棒杆菌糖代谢中一种重要的回补酶,催化丙酮酸羧化生成草酰乙酸的回补反应.以钝齿棒杆菌（Corynebacterium crenatum）突变株CD945的基因组为模板,运用PCR的方法,扩增出丙酮酸羧化酶的基因（pyc）片段.PYC基因在C.crenatum CD945中得到表达.SDS-PAGE和Western blot检测到重组菌中该酶蛋白水平有明显的提高.利用CTAB渗透处理细胞和苹果酸脱氢酶偶联测试相结合的方法,进行酶活力的分析.将抗反馈抑制的天冬氨酸激酶（AK）基因和PYC基因串联,在C.crenatum CD945 中进行共表达.