【摘 要】
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目的：研究右美托咪定(dexmedetomidine，Dex)对谷氨酸(glutamate，Glu)所致PC12细胞损伤的保护作用及其机制。 方法：采用高浓度谷氨酸处理PC12细胞以建立细胞缺氧损伤模型。细胞
【出 处】
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中国人民解放军总医院 解放军医学院 解放军总医院 军医进修学院
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目的：研究右美托咪定(dexmedetomidine，Dex)对谷氨酸(glutamate，Glu)所致PC12细胞损伤的保护作用及其机制。 方法：采用高浓度谷氨酸处理PC12细胞以建立细胞缺氧损伤模型。细胞培养24h后，随机分为以下四组，(1)正常对照组(Con组)：给予生理盐水，不予造模;(2)阳性对照组(Dex组)：给予1μmol/L Dex，不予造模;(3)模型组(Glu组)：给予生理盐水并行Glu造模;(4)实验组(Dex+Glu组)：给予1μmol/LDex并行Glu造模。采用MTT法测定细胞存活率，采用试剂盒分别测定细胞培养液中LDH（lactate dehydrogenase，乳酸脱氢酶）释放量，细胞MDA(malondialdehyde，丙二醛)含量和SOD(superoxide dismutase，超氧化物歧化酶)活力，DCFH-DA染色后行流式细胞仪检测细胞内ROS(reactive oxygen species，活性氧类物质)水平，Fluo-8染色后行流式细胞仪检测细胞内钙离子含量，JC-1染色后行流式细胞仪检测细胞MMP(mitochondrial membrane potential，线粒体膜电位)，AnnexinⅤ和PI染色后行流式细胞仪检测细胞凋亡率。采用BCA法测定细胞蛋白浓度。采用Western Blot方法分别测定细胞中caspase-3、caspase-9、cyt-c、bax和bcl-2的蛋白表达情况。 结果：(1)给予20mmol/L Glu可使细胞存活率降低到对照组的（73.5±1.1）％，LDH释放量升高到对照组的2.2±0.1倍，细胞损伤程度适中，可以此建立细胞缺氧损伤模型。1μmol/L右美托咪定能拮抗谷氨酸所致PC12细胞损伤，使细胞存活率达到Con组的（82.3±4.0）％，显著高于Glu组(P＜0.05)，LDH释放量为Con组的1.8±0.1倍，显著低于Glu组(P＜0.05）。(2)与Glu组相比，1μmol/L Dex显著降低谷氨酸诱导的细胞MDA含量的增加（P＜0.05），提高SOD活力(P＜0.05），抑制胞内ROS过度生成(P＜0.05)，降低胞内Ca2+浓度(P＜0.05)。(3)与Glu组相比，1μmol/L Dex显著减轻线粒体膜电位的下降(P＜0.05），降低谷氨酸诱导的细胞凋亡率的增加(P＜0.05），下调线粒体介导的凋亡通路中caspase-3、caspase-9、cyt-c、bax蛋白表达(P＜0.05），上调bcl-2蛋白表达(P＜0.05）。 结论：右美托咪定对谷氨酸所致PC12细胞损伤具有保护作用，其机制可能与右美托咪定抑制细胞氧化应激和细胞内钙超载，从而减轻细胞损伤有关。右美托咪定作用于谷氨酸损伤PC12细胞，能够稳定线粒体膜电位，下调线粒体介导凋亡途径中caspase-3，caspase-9，cyt-c和促凋亡蛋白bax蛋白表达，上调抗凋亡蛋白bcl-2蛋白表达，从而降低细胞凋亡率，抑制线粒体介导凋亡的发生，这可能是右美托咪定对谷氨酸损伤PC12细胞发挥保护作用的另一机制。
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