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背景： 在影响生殖健康的各种疾病中,复发性自然流产是其中重要的一种,其中60%-70%患者病因不明,称为不明原因复发性流产(unexplained recurrent Spontaneous abortion,URSA).研究认为大多数的不明原因复发性流产与免疫异常有关.最近的研究发现母胎界面上适当的炎症反应有助于母胎免疫平衡的建立和着床的成功,但过度的炎症反应会杀伤胚胎,影响其分化和生长,甚至导致胚胎停止发育.SOCS是细胞内的信号调节蛋白,在细胞因子或其他刺激物诱导后,SOCS表达上调,其表达的方式和时间因刺激因子和所在组织的不同而改变.近期的研究发现URSA患者蜕膜调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)、TLR4、TLR9表达下调,提示蜕膜TLRs异常表达可能参与URSA的发病机制7：.但流产是一个多因素共同作用的复杂过程,天然免疫反应在妊娠中的免疫调节作用也远不止TLRs的激活和细胞因子的释放,其相关的调控因子SOCS亦可能参与流产的发生.最近几年的研究发现SOCS3在滋养细胞中改变与流产的发生相关,但具体机制仍未完全清楚. 目的： 本研究通过测定不明原因复发性流产患者及正常早期妊娠要求人工流产患者绒毛组织滋养层细胞SOCS3mRNA、SOCS3蛋白的表达水平,探讨SOCS3在不明原因复发性流产的作用及相关作用机制. 方法： 1.选择2016年12月至2017.3在广州市妇女儿童医疗中心产科门诊及住院的不明原因复发性流产患者20例(研究组),根据谢幸主编的《妇产科学》第八版的诊断标准进行诊断;随机选择该院同期就诊的正常妊娠要求人工终止妊娠的患者20例作为正常对照组. 2.搜集不明原因复发性流产患者及正常妊娠要求人工终止妊娠患者的绒毛组织,分离纯化滋养层细胞并进行鉴定. 3.采用RT-PCR检测不明原因复发性流产患者组及正常妊娠要求人工流产患者组绒毛滋养层细胞SOCS3mRNA的表达水平,了解不明原因复发性流产组及正常妊娠要求人工流产组SOCS3mRNA的表达是否存在差异. 4.通过Western blot法测定不明原因复发性流产患者组及正常妊娠要求人工流产患者组细胞内SOCS3蛋白表达水平是否存在差异. 5.使用统计学软件spss13.0进行统计学分析,实验测得条带光强度均数±标准差(Σx±s)表示.S-W方法进行正态性检验,方差齐时,SOCS3mRNA及SOCS3蛋白的比较采用t检验,方差不齐时两两比较采用DunnettsT3检验统计,检验水准选用ɑ=0.05作为检验水准,P<0.05表示差别有统计学意义. 结果： 1.两组一般特征 两组孕妇年龄、取材孕周、清宫前体质指数(BMI)、身高比较,差异无统计学意义.(P>0.05). 2.经过分离后的滋养层细胞较大,且形态较一致,经过24小时的培养,约80%的细胞贴壁生长并可见细胞聚集融合,细胞成三角形或多边形样,细胞核大,呈卵圆形.细胞角蛋白染色阳性,波形蛋白染色阴性率约75%-80,经过DAB染色后呈棕黄色的为阳性结果,实验结果显示细胞角蛋白7在细胞膜、细胞浆染色成棕黄色,阳性表达的细胞大于90%(Fig1-3),而波形蛋白染色阴性,说明经过纯化过程分离培养的细胞中无间质细胞的生长.经过分离培养的细胞可认为是滋养层细胞. 3.RT-PCR检测两组SOCS3基因的表达 通过RT-PCR检测结果表明不明原因复发性流产患者组绒毛滋养层细胞SOCS3mRNA表达水平为(0.32±0.08)、正常妊娠要求人工流产组患者绒毛滋养层细胞SOCSmRNA表达水平为(0.65±0.10)两者比较结果显示不明原因复发性流产组患者绒毛滋养层细胞SOCS3mRNA表达水平明显低于正常妊娠要求人工流产患者组绒毛滋养层细胞SOCS3mRNA表达水平,差异有统计学意义(P<0.05) 4.Western blot检测细胞内SOCS3蛋白的表达 通过Western blot实验,不明原因复发性流产组SOCS3蛋白的表达为0.75±0.33,正常妊娠要求人工终止妊娠组SOCS3蛋白的表达为0.97±0.32,P<0.05,差异有统计学意义,可以认为不明原因复发性流产组SOCS3的表达水平低于正常妊娠要求人工终止妊娠组SOCS3的表达水平. 结论： 1.SOCS3基因在不明原因复发性流产患者滋养层细胞中低表达,SOCS3基因在正常妊娠患者滋养层细胞中高表达,推测SOCS3的低表达可能参与了不明原因复发性流产的发生过程. 2.SOCS3对于维持妊娠具有重要作用,SOCS3的水平低下时,流产发生的风险较大.