论文部分内容阅读
Epstein-Barr病毒,简称EB病毒(EBV),属于疱疹病毒,γ亚科。一旦感染,终生潜伏。随着我国经济的发展和城市工业化进程的加速,临床实践表明儿童EBV原发感染年龄后推,相关疾病传染性单核细胞增多症及重症疾病如EB病毒相关噬血淋巴组织细胞增生症(Epstein-Barr virus-associatedhemophagocytic lymphohistiocytosis,EBV-HLH)、慢性活动性EBV感染(chronicactive Epstein-Barr virus infection,CAEBV)及淋巴瘤发病率有上升趋势。因此,有必要研究EBV相关疾病的发病机制及干预措施。
原发感染后,EBV建立潜伏感染,潜伏在B淋巴细胞,主要表达潜伏感染相关抗原,随细胞周期的复制进行单拷贝复制,机体建立针对EBV各种抗原肽的特异性细胞免疫功能,对EBV的过度复制及恶性转化细胞起到免疫监视作用,与EBV相关疾病的发病机制息息相关。因此,研究针对EBV各种抗原肽的特异性细胞免疫功能不仅对研究EBV相关疾病的发病机制有重要意义,而且,还可为进一步。EBV相关疫苗的开发及以EBV为靶点的生物治疗提供理论依据。
本研究的第一部分根据T细胞的记忆功能,即再次接触同一抗原肽后可释放细胞因子的特点,应用酶联免疫斑点法测定EBV相关疾病时外周血中的单个核细胞对EBV特定抗原肽的识别能力,目的是找出能反映机体现行状况下对EBV免疫能力的指标。该研究根据中国人HLA表位的特点及EBV各种抗原肽的意义,合成若干条EBV裂解及潜伏抗原的T细胞表位肽,通过对以EBV原发感染为主的儿童样本及健康成人样本的研究,初步建立了酶联免疫斑点法测定EBV特异性T细胞功能的研究方法。研究结果通过各指标的相关性分析即关联分析及聚类的统计学方法,目的是筛选出对临床及进一步的研究有意义的抗原肽。该研究发现现有的研究对象具有A2、A11表位者较多,且来源于EBV裂解抗原肽BMLF1的针对A2表位的GLC肽段在具有相应表位的原发感染患者中阳性反应率较高。研究还发现,虽然LMP2并不是优势表位肽,但如果将针对中国人常见HLA表位的不同的6条T细胞表位肽混合,明显可提高阳性反应率。研究结果表明:在EBV原发感染后针对裂解抗原肽(BZLF1、BMLF1)的特异性T细胞随病程进展呈现缓慢下降趋势,而针对潜伏抗原肽(EBNA1、EBNA3A、EBNA3B)的特异性T细胞随病程进展呈现缓慢上升趋势。该研究的结论是,应用EBV的T细胞表位肽为刺激物建立的ELISPOT方法测定EBV特异性T细胞,可从某种程度上反映机体在现行状况下对EBV的免疫功能,尤其是动态观察上述指标对免疫缺陷儿童有较大的临床意义。该研究的重要意义还在于发现儿童EBV原发感染后对LMP2有识别能力,如进一步研究EBV相关重症疾病对LMP2的识别情况,有望借助病毒所LMP2疫苗的研究,开发出儿童EBV相关重症疾病的以EBV为靶点的生物治疗,LMP2特异性细胞免疫功能的研究可为EBV相关重症疾病过继免疫治疗的病例筛选及治疗后疗效监测及疗程确定提供特异性的观察指标。
本研究的第二部分是针对目前临床现有EBV相关疾病实验室诊断的不足,建立荧光定量PCR检测外周血EBV病毒载量的方法,目的是明确现行状况下外周血中EBV的复制水平,研究发现,血浆中EBV游离DNA与单个核细胞中的EBV-DNA存在很强的线性相关;同时发现,EBV载量在EBV重症疾病时明显升高,阳性率明显高于普通原发EBV感染者;并且发现在免疫功能正常时,EBV原发感染不存在持续的高水平病毒复制期。该研究对EBV相关疾病的病因学诊断及临床干预提供理论依据,尤其是外周血病毒载量可作为CAEBV及EBV-HI,H最有用的诊断指标之一。