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迟缓爱德华氏菌（Edwardsiella tarda）是一种感染宿主广泛的革兰氏阴性菌，能够引起鱼类的迟缓爱德华氏菌病(Edwardsiellasis)和人类的胃肠道感染等疾病。Ⅲ型分泌系统（typeⅢ secretion system，T3SS）是迟缓爱德华氏菌的重要毒力因子分泌系统，迟缓爱德华氏菌利用Ⅲ型分泌系统将效应分子从细菌胞质直接传递至宿主细胞，进而调节宿主细胞多种信号传导途径并破坏其防御系统。输送器蛋白EseB是迟缓爱德华氏菌T3SS重要的装置蛋白，是构成功能性T3SS的必要因素。本研究针对EseB开展相关研究，揭示了EseB在迟缓爱德华氏菌聚集和生物膜形成过程中的作用。 本研究主要内容包括：⑴利用扫描电镜和透射电镜等技术，发现在迟缓爱德华氏菌野生型菌株表面存在一种纤丝状的结构，邻近的细菌利用这一结构彼此相连，而这一结构在△eseB菌株中不存在;这一纤丝结构直径约10nm，长度范围82-3065 nm，平均650 nm，在400-800 nm分布最多;细菌间纤丝的连接方式主要有以下“A→B”、“A→←B”和“分裂与结合”三种模式;利用免疫荧光、免疫扫描电镜和免疫透射电镜技术分析纤丝的主要成分是EseB;EseB蛋白C端影响纤丝的合成和功能;同时，我们发现类似“EseB纤丝”的结构连接在E tarda和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）之间。⑵用结晶紫染色、激光共聚焦显微镜、扫描电镜和免疫荧光等技术，揭示了EseB纤丝在迟缓爱德华氏菌生物膜形成过程中的作用。免疫荧光和扫描电镜试验结果表明，迟缓爱德华氏菌生物膜形成分为如下阶段，即粘附阶段(0-17 h)、微菌落形成阶段(18-23 h)和成熟生物膜形成阶段（24h后）。EseB纤丝在生物膜发展的不同阶段作用如下:(1)粘附阶段:迟缓爱德华氏菌利用EseB纤丝粘附于介质（如盖玻片）表面;(2)微菌落形成阶段:迟缓爱德华氏菌开始出现聚集，EseB纤丝不仅粘附于介质表面，同时邻近的细菌利用EseB纤丝彼此相连;(3)成熟生物膜形成阶段:迟缓爱德华氏菌进一步聚集，形成成熟生物膜，此时EseB纤丝在不同细菌之间交错相连，形成了牢固、稳定的网状三维结构。迟缓爱德华氏菌生物膜有以下特点:生物膜厚度约25μm;生物膜中存在大量的孔道结构，其内部细菌被丰富的胞外基质包裹;胞外多糖(extracellularpolysaccharide，EPS）和胞外DNA(extracellular DNA，eDNA)是胞外基质的重要组分，胞外多糖分布基本覆盖整个生物膜，而eDNA的分布主要集中在生物膜内部;生物膜的形成不依赖于鞭毛;△eseC和△eseD菌株生物膜形成能力比野生型菌株弱;在胰蛋白胨大豆肉汤(tryptic soy broth，TSB)培养条件下，迟缓爱德华氏菌生物膜形成能力弱于在Dulbeccos modified Eagles medium(DMEM)培养基。⑶抗EseB抗体能够抑制迟缓爱德华氏菌的聚集。随抗体浓度增加，聚集程度逐渐降低，当浓度为1∶100时，聚集被完全抑制;EseB抗体抑制未成熟生物膜(15 h)的形成，随抗体浓度增加，生物膜形成能力逐渐降低，当浓度为1∶100时，细菌基本变为单层分布，与对照组相比，处理组中EseB纤丝的数量减少，长度变短;EseB抗体不能破坏成熟生物膜(24 h)，与对照组相比，各处理组中EseB纤丝的数量和长度均无显著变化。