论文部分内容阅读
青光眼是全球主要的致盲眼病，也是我国首位不可逆的致盲性眼病。了解青光眼的发病机制，对其进行早期诊断、早期治疗，是研究青光眼的重点课题。
基质金属蛋白酶(MMP)是一类锌离子依赖性内源性蛋白水解酶，主要功能是降解细胞外基质(ECM)和基底膜。基质金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)是MMP天然的抑制剂之一。在人类的小梁网细胞上存在着MMP与TIMP，二者作用的平衡性对正常人眼维持小梁ECM与房水外流通畅十分重要。许多因素可以影响MMP/TIMP的平衡性。而ELAM-1作为目前发现的唯一的青光眼特异性分子标记，研究其对MMP/TIMP平衡的影响将加深我们对青光眼发病机制的了解。
在本实验中，主要研究氧化应激对小梁细胞表达MMP-3及TIMP-1的影响及ELAM-1与抗体结合后对小梁细胞MMP-3/TIMP-1平衡的影响。由此进一步了解ELAM-1在青光眼发病机制中的作用。实验分为两个部分。
一、氧化应激下房水外流通路MMP-3及TIMP-1表达的研究目的：研究氧化应激对小梁细胞表达MMP-3/TIMP-1的影响，了解青光眼小梁细胞MMP/TIMP之间的平衡机制。
方法：将原代培养的猪小梁细胞血清饥饿培养16小时，分成对照组和H2O2组，对照组加入无血清培养基，H2O2组加入新鲜配制的1mmol/L的H2O2，5％CO2培养箱中37℃30分钟。分别用免疫组化法、ELISA法和RT-PCR法检测小梁细胞MMP-3及TIMP-1的表达。
结果：以上三种方法显示对照组MMP-3及TIMP-1表达均为阴性，H2O2组MMP-3及TIMP-1表达均为阳性，MMP-3/TIMP-1平衡未破坏。
结论：本实验结果表明，氧化应激可以诱导小梁细胞表达MMP-3及TIMP-1，并不破坏MMP-3/TIMP-1平衡关系。
二、ELAM-1对小梁细胞表达MMP-3及TIMP-1的影响目的：通过研究ELAM-1与抗体结合后对小梁细胞表达MMP-3及TIMP-1的影响，进一步了解ELAM-1在青光眼发病机制中的作用。
方法：将原代培养的猪小梁细胞血清饥饿培养16小时，分为六组：Ⅰ)对照组，不加入任何药物；Ⅱ)IL-1α组，加入IL-1α刺激；Ⅲ)ELAM-1Ab组，用IL-1α刺激后，再加入ELAM-1Ab;Ⅳ)ELAM-1Ab同时加入组，同时加入IL-1α和ELAM-1Ab；Ⅴ)IgG组，用IL-1α刺激后，加入ELAM-1Ab，再加入IgG交联；Ⅵ)IgG同时加入组，同时加入IL-1α、ELAM-1Ab和IgG。对以上六组在相同作用条件下作用后，分别用免疫组化法、ELISA法和RT-PCR法检测小梁细胞MMP-3及TIMP-1的表达，同时用免疫组化法检测ELAM-1的表达。
结果：在原代培养的猪小梁细胞中，免疫组化和ELISA法显示第1组TIMP-1表达为阴性，其余五组TIMP-1表达均为阳性；RT-PCR显示以上六组TIMP-1表达均为阳性。免疫组化法显示Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ组的MMP-3表达为阳性，而RT-PCR显示只有Ⅱ组的MMP-3表达为阳性，其余几组MMP-3表达均为阴性。另外，免疫组化法显示Ⅱ组的ELAM-1表达为阳性，其余几组ELAM-1表达均为阴性。
结论：外源性IL-1α能刺激猪小梁细胞表达ELAM-1、MMP-3和TIMP-1，ELAM-1与抗体结合或进一步与IgG交联后可以抑制MMP-3的表达，但不影响TIMP-1的表达，使得MMP/TIMP平衡被破坏。
基于以上两部分实验结果，推测ELAM-1与抗体结合后破坏MMP/TIMP平衡可能在青光眼的发病机制中具有重要作用。