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目的：近期一些文献报道了microRNA miR-129-2基因在多种人类肿瘤中发生高度甲基化，并且由于甲基化等表观遗产学改变导致miR-129-2成熟体表达水平下降。SOX4作为重要的转录调控因子，已发现在多肿瘤中表达升高，miR-129-2甲基化导致的表达水平下调是SOX4过表达的机制之一。在针对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)的研究中，SOX4的表达上调和miR-129-2在肝癌细胞系中的高度甲基化均有报道，但从miR-129-2甲基化到miR-129-2成熟体表达下降，再到SOX4过度表达的调节过程，是否也在肝癌中发生，还有待阐明。在本研究中，我们对三者在肝癌中的状态进行检测，通过细胞系实验阐明miR-129-2与SOX4表达的关系。
方法：Tapman探针法检测miRNA-129-3p(miR-129-2的成熟体形式)在慢性HBV感染肝细胞癌(HCC)病人的癌组织及配对的癌旁组织中的表达水平，已知靶基因SOX4的mRNA表达水平用实时定量PCR进行检测，SOX4蛋白表达水平通过Western blot实验和免疫组化方法检测。以同样的方法对HCC细胞系中miR-129-3p及SOX4的表达水平进行检测。miR-129-2表达质粒转染HepG2细胞系，通过流式细胞技术检测细胞周期变化，从而分析对细胞增殖的影响。采用新建立的基于DNA甲基化敏感酶和甲基化依赖酶对样本处理并定量扩增的甲基化检测方法对miR-129-2基因甲基化检测状态进行检测。对miR-129-2甲基化状态及SOX4表达水平与临床资料和病理特征的关系采用x方检验分析。
结果：miR-129-2成熟体miR-129-3p在HCC肿瘤组织中的表达水平明显低于对应癌旁组织(p=0.0005)，而SOX4在癌组织中的表达显著上调(p=0.015)。转染miR-129-2表达载体的HepG2细胞SOX4水平下降。定量检测75对配对HCC癌组织和癌旁组织中miR-129-2启动子区甲基化状态，43％(31/75)的癌组织都检测到了甲基化发生，高于对应癌旁组织的16％(12/75)。miR-129-2高甲基化的组织相应的miR-129-3p水平下调，二者呈负相关。在5种HCC细胞系中，发现miR-129-3p表达下调对应SOX4表达上升，同样呈负相关。在对miR-129-2启动子甲基化状态同临床资料和病理特征做统计分析时发现，miR-129-2基因的甲基化状态同肿瘤肝内播散现象相关。
结论：1.SOX4在肝癌中的表达水平显著高于癌旁配对组织，miR-129-2成熟体在肝癌中表达下降。miR-129-2在肝癌细胞中可下调SOX4的表达水平。2.miR-129-2基因在肝癌组织中甲基化水平高于癌旁及细胞系中有高甲基化现象，且甲基化状态与肿瘤肝内播散具有相关性，有肿瘤肝内播散组的甲基化比率更高。3.SOX4表达受miR-129-2调控，过表达miR-129-2可使SOX4表达水平下降。过表达miR-129-2的HepG2细胞细胞周期受到抑制，G1期细胞明显增加。miR-129-2表达下调可能是SOX4在HBV慢性感染及肝硬化背景肝癌中表达升高的机制之一。本研究首次在肝癌组织中发现了miR-129-2的高甲基化现象并且这种高甲基化现象与肿瘤肝内播散具有相关性，另外，首次发现其成熟体miR-129-3p在肝癌组织中表达下降。