【摘 要】
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目的：建立以双向凝胶电泳技术分离蛋白和高效液相质谱联用技术鉴定蛋白为基础的肿瘤组织蛋白质组学平台。并利用该平台寻找与结直肠癌发生发展相关的蛋白质。并进一步验证发现
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目的：建立以双向凝胶电泳技术分离蛋白和高效液相质谱联用技术鉴定蛋白为基础的肿瘤组织蛋白质组学平台。并利用该平台寻找与结直肠癌发生发展相关的蛋白质。并进一步验证发现的S100A11在大肠癌组织和正常粘膜表达存在差异；研究其与大肠癌发生发展的关系。
方法：收集临床结肠癌患者的新鲜正常粘膜组织和结肠癌组织,置于-80℃冰箱保存。通过10例大肠癌组织及相应正常粘膜的蛋白质提取,Bradford法蛋白定量。通过蛋白所带电荷和分子量大小进行等电聚焦聚丙烯酰胺双向电泳,考马斯亮蓝染色,比对两组蛋白电泳图谱,寻找差异蛋白。将差异蛋白点经过切胶、乙腈脱水处理、高效液相质谱连用测定氨基酸序列,网络查询,鉴定蛋白质。收集89例临床结肠癌患者的新鲜正常粘膜组织和结肠癌组织,通过western Blot和免疫组化检查S100A11和结直肠癌分化和分期的关系；通过免疫荧光和免疫组化寻找S100A11在大肠癌细胞中的亚细胞定位。
结果：改良后的双向凝胶电泳技术可以获得较好的肿瘤组织双向电泳图谱；图谱中分子量在9～130kDa及pH在4～9区域的蛋白分离效果较好。通过图谱比较和切取图谱中表达差异蛋白质点,LC-MS/MS质谱鉴定,发现差异蛋白,从而建立了肿瘤组织蛋白质组学平台。在大肠癌组织和相应正常粘膜中发现并鉴定了包括钙结合蛋白100A11、GTP结合蛋白、热休克蛋白27等20种差异表达蛋白。在结直肠正常粘膜组织中,S100A11的表达以细胞浆为主,但在大肠癌组织中S100A11在细胞核及细胞浆中均有表达,以细胞核表达为主。并且随着结直肠癌的分期进展,S100A11的表达量逐渐升高。
结论：1、建立了以改良双向凝胶电泳技术分离蛋白和高效液相质谱联用技术鉴定蛋白为基础的肿瘤组织蛋白质组学平台。2、钙结合蛋白100A11、GTP结合蛋白、热休克蛋白27等20种蛋白被鉴定出在大肠癌肿瘤组织和相应正常粘膜表达存在差异。3、S100A11的表达随着结肠癌疾病的病期进展而逐渐升高,这些发现有助于大肠癌的临床分期以及大肠癌的病理研究。
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