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复智散是一个中药复方,临床用于治疗阿尔茨海默病(AD)已将近15年。实验证明,FZS能够改善AD患者和模型大鼠的认知功能,维护细胞的正常生理状态,对抗β-淀粉样蛋白(Aβ)的细胞毒性。SPECT研究发现,FZS能够改善AD患者额叶、颞叶和扣带回部位的血流。本文对FZS治疗AD的作用及机理进行了研究。
⑴研究FZS对自然老化小鼠认知功能的影响及其作用机理。通过Morris水迷宫检测小鼠的认知功能,免疫组织化学、Western-blot、RT-PCR检测FZS对海马内源性神经干细胞数量、增殖、分化及存活的影响。检测海马区神经元及胆碱能神经元数量的变化。研究结果显示,FZS 1.2、2.4g/kg能够明显改善老年小鼠的认知功能,促进海马区神经干细胞的增殖、分化,增加海马部位神经细胞及胆碱能神经元的数量。改善脑内微环境从而降低胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达。说明FZS能够通过调整脑内微环境的改变,抑制胶质细胞增生,从而促进神经干细胞的增殖、分化及新生神经细胞的存活并与周围建立突触联系,取代由于脑老化及相关神经退行性疾病特别是AD造成的神经细胞丢失,达到治疗脑老化的效果。
⑵研究FZS对自然老化大鼠认知功能的影响及其作用机理。通过Morris水迷宫检测大鼠的认知功能,正电子发射断层扫描(microPET)检测大鼠脑代谢,比色法检测海马内胆碱乙酰基转移酶(ChAT)活性,乙酰胆碱(ACh)含量,Western-blot检测ChAT含量。实验结果显示,各给药治疗组大鼠海马内ChAT活性、ChAT及ACh含量均明显增高,所以我们认为,FZS可通过调节海马内胆碱能系统的损害来改善其认知功能,从而达到治疗老年认知功能障碍尤其是AD的效果。MicroPET检测结果显示,FZS 0.3、0.6及1.2g/kg/d能明显增加颞叶和顶叶的糖代谢,增加脑代谢可能是FZS治疗老年认知功能障碍或AD的另一个重要途径。
⑶观察FZS对Aβ25-35诱导的AD模型小鼠的治疗作用。采用Aβ25-35侧脑室注射制作AD小鼠模型,以不同剂量的FZS灌胃治疗,通过Morris水迷宫和小鼠穿梭程序自动控制仪检测小鼠的认知功能,采用比色法测定小鼠脑内胆碱乙酰基转移酶(ChAT)、乙酰胆碱酯酶(AChE)活性及乙酰胆碱(ACh)含量。结果显示,不同剂量的FZS不仅对AD小鼠的认知功能有明显的改善作用,且能增加AD小鼠脑内的ChAT活性及ACh含量,并降低AChE活性。因此,FZS在1.25～10 g·kg-1剂量范围内均有治疗小鼠AD的作用,但用1.25 g/kg剂量时治疗效果最佳。观察FZS对抗Aβ25-35细胞毒性的作用。本实验使用SH-SY5Y细胞株,采用人Aβ25-35制作AD细胞模型。分别加入FZS水提液、含药血清及含药脑脊液,观察FZS对抗Aβ毒性的作用。应用形态学观察和流式细胞术证明FZS具有对抗Aβ的细胞毒性,保护细胞膜,促进细胞的生长和增殖,抑制细胞死亡,从细胞学角度揭示FZS治疗AD的作用机制。