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[目的]
山奈酚(Kaempferol)主要是从姜科植物山奈的根茎中提取的一种具有抗癌作用的化学活性物质，本实验通过研究山奈酚对人鼻咽癌细胞株CNE-2的增殖、凋亡及细胞周期的影响，并探讨其分子作用机制，旨在为鼻咽癌的多模式治疗拓展新的植物化学药物治疗提供实验资料。
[方法]
(1)体外培养人鼻咽癌细胞CNE-2，MTT比色法检测山奈酚对CNE-2细胞增殖的影响。(2)倒置相差显微镜及荧光显微镜观察CNE-2细胞凋亡形态学变化。(3)流式细胞术(FCM)PI染色法检测细胞凋亡。(4)DNA ladder检测细胞凋亡。(5)流式细胞术(FCM)PI染色法检测细胞周期的改变。(6)Western blot检测Bax、Bcl-2、P53、P21及Cyclin B1蛋白的表达。
[结果]
(1)不同浓度的山奈酚分别处理CNE-2细胞24h、48h、72h后，随着药物浓度的增大，细胞活力逐渐下降，并呈现剂量和时间依赖效应。(2)不同浓度的山奈酚处理CNE-2细胞24h、48h、72h后，其IC50值分别为(184.1±10.1)、(53.9±3.1)、(27.5±1.8)μmol/L，48、72h的IC50值明显低于24h的IC50值，差异有显著性统计学意义(P<0.01)。(3)不同浓度的山奈酚处理CNE-2细胞48后，光镜下显示细胞逐渐变圆，体积变小，细胞膜皱缩，胞质浓缩，细胞内颗粒增多；荧光染色显示胞核固缩碎裂，呈大小不等的不规则块状、圆形或花瓣状，出现典型的细胞凋亡形态学变化。(4)山奈酚处理CNE-2细胞72后能以剂量依赖的方式诱导CNE-2细胞产生凋亡。其中，山奈酚40、60、80、100μmol/L浓度组作用CNE-2细胞72h的凋亡率分别为(2.8±0.3)％、(6.5±0.3)％、(8.8±0.2)％、(7.0±0.3)％，明显高于对照组(0.4±0.1)％，差异有显著性统计学意义(P<0.01)。(5)DNA凝胶电泳图谱显示，60μmol/L_，及以上浓度组均出现明显“梯状”条带。(6)流式细胞仪分析显示：不同浓度山奈酚处理CNE-2细胞24h后，与对照组相比，G1期细胞减少，S期及G2期细胞增多，说明山奈酚能影响CNE-2细胞周期，使细胞停滞于S期及G2期，有利于细胞DNA的合成但阻止细胞分裂；药物处理CNE-2细胞72h，仅能阻滞细胞于G2期。(7)不同浓度山奈酚处理CNE-2细胞72h，P53及Bax蛋白表达增加，Bcl-2蛋白表达下降；不同浓度山奈酚处理CNE-2细胞48h，P21蛋白表达增加，Cyclin B1蛋白表达下降。
[结论]
(1)山奈酚体外具有对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖的抑制作用，并具有时间和剂量的依赖性。
(2)山奈酚以浓度依赖的方式诱导CNE-2细胞凋亡；山奈酚可能通过抑制Bcl-2蛋白表达，诱导Bax蛋白表达、活化，诱导产生经线粒体内源性途径的凋亡。
(3)山奈酚能诱导CNE-2细胞产生G2期阻滞；山奈酚可使P53蛋白表达增加，进而促进细胞周期抑制蛋白P21的表达，从而抑制Cyclin B1的活性，这可能是其产生细胞周期阻滞的途径。
(4)山奈酚可诱导CNE-2细胞产生细胞周期阻滞，抑制其增殖，并诱导其凋亡，有望成为一种极具前景的抗鼻咽癌药物。