小窝蛋白-1在食管癌转移中的作用及其机制的研究

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研究目的:  在细胞学水平检测小窝蛋白-1在食管癌转移中的作用并初步探索Cav-1与Rho/ROCK信号通路在食管癌进展中的相互作用。  研究方法:  1、用含10%胎牛血清,1%青霉素和1%链霉素的高糖 DMEM培养基培养人食管癌细胞株EC109、ECa109、TE1、TE13。  2、Western blot方法检测细胞株中Cav-1、pY14Cav-1的表达水平。  3、划痕试验检测四株细胞的迁移能力。  4、Cav-1 siRNA转染食管癌细胞株(EC109、TE1、TE13),转染试验分为Cav-1 siRNA1组, Cav-1 siRNA2组,阴性对照组、空白对照组;Western blot检测转染Cav-1 siRNA的效果。  5、ROCK抑制剂Y-27632以不同浓度作用于食管癌细胞(EC109、ECa109、TE1、TE13)同时筛选最佳作用浓度。  6、Transwell方法检测转染前后及药物作用前后细胞迁移、侵袭能力的变化。  结果:  1、Cav-1在食管癌细胞株(EC109、ECa109、TE1、TE13)中均有表达,其表达水平不一。pY14Cav-1仅在细胞株TE1、TE13中表达。  2、划痕试验结果显示表达 pY14Cav-1的细胞株 TE1、TE13的迁移能力明显强于不表pY14Cav-1的细胞株EC109、ECa109。  3、转染Cav-1 siRNA使细胞株中Cav-1表达水平降低后,细胞迁移、侵袭能力随之降低。4、ROCK抑制剂Y-27632以10umol/L浓度作用于细胞1小时,细胞EC109、ECa109中Cav-1表达水平降低,细胞迁移、侵袭能力同时降低。Y-27632对细胞中Cav-1表达水平的降低及细胞迁移、侵袭能力的抑制并不呈浓度依赖。  结论:  1、在EC109、ECa109、TE1和TE13四株细胞中, Cav-1的表达水平和细胞的分化程度无关。  2、利用 Cav-1-siRNA转染食管癌细胞降低细胞中Cav-1的表达水平,细胞的迁移、侵袭能力明显减弱。  3、ROCK抑制剂Y-27632能降低食管癌细胞EC109、ECa109中Cav-1的表达水平同时减弱细胞的迁移、侵袭能力。
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