荧光定量RT-PCR法研究两条人类新基因在泌尿系肿瘤中的表达变化及临床意义

来源 :第二军医大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chenzj071
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肿瘤的发生、发展以及转归是一个涉及到多种因素、多种机制、多个阶段的复杂过程。众多肿瘤相关基因的变化,已证明是决定肿瘤形成、演变及结局的重要因素。癌基因的激活以及抑癌基因的失活被认为与细胞的恶性转化密切相关。随着分子生物学技术的不断发展和后基因组时代的到来,肿瘤相关新基因的发现、鉴定及功能阐明成为巨大的挑战。新的肿瘤相关抑癌基因的发现及功能研究,对研究肿瘤发生机制、肿瘤的基因诊断及基因治疗方面都具有重要意义。 新基因的研究在方法学上业已取得了很大的进步。全长cDNA的克隆和测序将直接导致新基因的发现。基因表达谱芯片技术是近年来迅猛发展起来的可以对基因表达变化进行高通量平行研究的全新技术。荧光定量RT-PCR技术也是近年来崛起的一项将传统RT-PCR技术与探针杂交技术、荧光检测技术相结合,可对基因表达变化进行快速、精确定量检测的新技术,具有定量准确、重复性好和不易污染等显著特点。 本实验中所研究的2条基因由高质量的人胎脑cDNA文库中克隆测序得到。经生物信息学分析,证实为2条人类全长新基因。基因表达谱芯片研究发现,这2条基因在膀胱癌中呈下调表达。为进一步研究2条基因在膀胱癌中下调表达的程度以及在泌尿系肿瘤谱中的表达情况,并初步探讨其下调表达程度与泌尿系肿瘤生物学行为 第二军医大学硕士学位论文之间的关系,构建了定量检测2条新基因在泌尿系肿瘤中表达的荧光定量RT干CR方法,并应用该方法分别检测了2条新基因在泌尿系肿瘤细胞株、临床泌尿系肿瘤标本及相应正常组织中的表达量。结果显示,1.荧光定量RT干CR方法是一种定量检测基因表达丰度的有效方法,具有很好的临床应用前景;2.2条新基因在人体生理和病理情况下是确实表达的;3.2条新基因在泌尿系肿瘤中表达下调;4.其中一条基因的表达下调可能与膀脱癌的复发和/或高分期有关。因此我们初步认为这是两条与泌尿系肿瘤发生有关的新基因,而且可能是某种新的抑癌基因;对该基因的临床检测可能可以作为临床诊断、判断病情及预后的指标。确切的作用机制,临床的实际应用价值和可能性都有待于进一步大量的工作。
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