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细胞凋亡(apoptosis),是一种自主的、有序的,并按照某种预定程序发生的生理性自然死亡过程,是当前生命科学研究中的热门领域之一。凋亡体(apoptosome),是在线粒体介导的凋亡途径中,由细胞色素C (Cytochrome c, Cytc)、ATP/dATP、凋亡酶激活因子-1(apoptotic protease activating factor-1, Apaf-1)以及procaspase-9 (Caspase-9的前体)构成的约700 kDa、具有很强的Caspase酶激活活性的大分子蛋白复合物,它能使procaspase-9自剪切成两段而被活化为Caspase-9,进而切割和活化下游的效应Caspase-3,启动Caspase级联反应,导致不可逆的细胞凋亡。研究表明,哺乳动物细胞发生的线粒体凋亡途径中有凋亡体的存在,并在胚胎发育中起至关重要的作用。本文即对昆虫的凋亡细胞中凋亡体的存在与否进行了初步的研究。病毒感染是一种常见的引起细胞凋亡的因素,本实验以杆状病毒AfMNPV诱导昆虫细胞Sl-1发生凋亡,分别采用DAPI染色法、琼脂糖凝胶电泳法、荧光分光光度法、Western Blotting等方法检测了凋亡细胞的形态学与生物化学特性Caspase-9活性及凋亡体复合物的存在与否。用AfMNPV感染Sl-1细胞不同时间,DAPI染色与琼脂糖凝胶电泳结果均显示,杆状病毒感染Sl-1细胞8h后,能诱导发生细胞凋亡。由于凋亡体形成后,首先激活Caspase-9,因此我们采用荧光分光光度法,使用Caspase-9的特异性荧光底物Ac-LEHD-AFC和Caspase-9特异性抑制剂Z-LEHD-FMK检测凋亡细胞的Caspase-9的活性,结果表明,在AfMNPV诱导Sl-1细胞8h后即可检测出Caspase-9的活性,并在AfMNPV诱导Sl-1细胞24 h时Caspase-9的活性达到最高值。为了进一步检测凋亡细胞是否有凋亡体的产生,我们又用Western Blotting分析了凋亡体复合物的蛋白质组分,结果显示,以AfMNPV诱导Sl-1细胞6h后能检测到组成凋亡体的蛋白质,但12h后相应的蛋白质组分消失。以上这些研究结果表明,AfMNPV能诱导Sl-1细胞调亡，并初步认定昆虫细胞凋亡与哺乳动物细胞一样也有凋亡体的存在