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目的探讨puma（p53 upregulated modulator of apoptosis）基因突变与肺癌的相关性。方法通过对实验条件的探讨,优化并最终确立了puma基因三个高GC含量外显子的扩增体系和条件,使GC含量高达82%的第二外显子得以成功扩增。再应用优化后的体系和条件对34例肺癌患者的癌组织,癌旁组织和远癌组织以及7例肺良性病变患者的肺组织的puma基因2,3,4三个外显子进行了PCR扩增,扩增产物经纯化后测序检测突变及小的删除片段。结果1.通过对实验条件的探讨,确立了puma基因三个外显子的最终扩增体系和条件,分别如下:（1）外显子2（Exon2）的反应体系为dNTP 200μmol/L,增强体系MgSO43.0mmol/L,引物500nmol/L,Taq DNA聚合酶0.1U/μl,模板量不低于4000ng,10×增强体系缓冲液5μl,增强液10μl,总体积50μl。反应条件为95℃预变性5分钟,95℃45秒、64℃45秒、72℃45秒循环33次,最后72℃延伸5分钟。（2）外显子3（Exon3）的反应体系为dNTP 200μmol/L,增强体系MgSO42.0mmol/L,引物500nmol/L,Taq DNA聚合酶0.1U/μl,模板量不低于4000ng,10×增强体系缓冲液5μl,总体积50μl。反应条件为95℃预变性5分钟,95℃45秒、64℃45秒、72℃45秒循环33次,最后72℃延伸5分钟。（3）外显子4（Exon4）的反应体系为dNTP 200μmol/L,普通MgCl21.0mmol/L,引物500nmol/L,Taq DNA聚合酶0.1U/μl,模板量不低于4000ng,普通10X扩增体系缓冲液5μl,总体积50μl。反应条件为94℃预变性5分钟,94℃45秒、61℃45秒、72℃45秒循环33次,最后72℃延伸5分钟。2.应用优化后的扩增体系和条件对34例肺癌患者的癌组织,癌旁组织和远癌组织以及7例肺良性病变患者的肺组织的puma基因2,3,4三个外显子进行了PCR扩增,扩增产物经纯化后测序检测突变及小的删除片段,经Blast2与标准DNA序列比对,未发现一例突变及小的删除片段。结论1.Puma基因DNA序列中三个外显子的编码序列十分稳定和保守,不容易受到来自外界环境和自身的各种诱发突变的因素影响。2.Puma基因突变可能不是伴随肺癌发生发展过程的重要因素。3.在肺癌发生发展过程中,即便puma的表达出现异常,其功能蛋白数量发生异常甚至缺失,引起生理和病理性的凋亡改变,也可说明这一系列的改变并非由基因突变引发,可能由调控序列或启动子区的改变或异常引起,也可能是发生于puma基因转录和/或翻译水平。