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目的：
对黄嘌呤进行结构修饰合成一系列衍生物,并针对MAO-B和腺苷A2A受体这两个靶点对这些衍生物进行双抗活性筛选。
方法：
1.以甲基黄嘌呤为母核,以1、3-二甲基脲和氰乙酸为原料,经过成环,亚硝基化,还原得到5、6-二氨基-1,3二甲基尿嘧啶,与取代苯酰氨基苯甲酸经过成酰胺键、成环、甲基化等反应合成系列衍生物(茶碱衍生物XD5a-XD5c、XD6a-XD6c和咖啡因衍生物XD7a-XD7c、XD8a-XD8c)。
2.用蛋白含量测定试剂盒,加入制备好的化合物溶液抑制MMAO-B,并以二氢嗅犬脲胺为底物与剩余MAO-B结合生成荧光物质4-氢奎宁,在激发光(Ex)315nm,发射光(Em)380hm处分别测定荧光强度,间接得出化合物对MAO-B的抑制能力。
3.A2A受体抑制能力体外实验:采用放射性配体-A2A受体竞争结合实验,主要参照lione等人报道的方法,数据用Prism4进行处理。
结果：
1.共合成两个系列12个未见报道的新化合物(茶碱衍生物XD5a-XD5c、XD6a-XD6c和咖啡因衍生物XD7a-XD7c、XD8a-XD8c),通过了IR、1H-NMR、ESI-MS的确认。
2.目标化合物除了咖啡因衍生物XD7a-XD7c的抑制常数较高,其他化合物的抑制常数均较低。抑制能力最好的化合物XD7a的Ki=0.26μM为8-(3-Cl-苯基)咖啡因(Ki=36μM)的140倍,为CSC(Ki=128nM)的二分之一,与化合物8-(3-Cl-苯基)咖啡因化合物的抑制能力相比,说明8-苯基咖啡因的苯基增加共轭系统能增强MAO-B的抑制能力。茶碱衍生物XD5a-XD5c,XD6a-XD6c比咖啡因衍生物XD7a-XD7c,XD8a-XD8c的抑制常数低,证明了咖啡因结构能够增强MAO-B抑制能力。
3.体外实验表明,化合物XD7a,XD7b,能与[3H]-SCH58261(A2AR)竞争性结合正常小鼠脑组织A2A受体,而且化合物XD7a,XD7b,XD8a,XD8b呈浓度依赖性抑制了[3H]-SCH58261与小鼠脑组织A2A受体的结合,得到半数抑制浓度IC50和Ki。Prism4.03软件分析后发现,化合物XD7a,XD7b,XD8a更符合单位点竞争结合。
结论：
本课题旨在以CSC为基础,修饰黄嘌呤得到衍生物以对这些化合物的A2A受体和MAO-B的双抗活性进行研究。从实验结果看出,黄嘌呤的一种衍生物8-(取代苯酰胺基-苯基)咖啡因的双抗活性较好,化合物XD7a-XD7c的MAO-B的抑制常数较高,尤其是XD7a的Ki=0.26μM,为CSC的MAO-B抑制能力的二分之一。而且化合物XD7a,XD7b,XD8a,XD8b的体外A2A受体拮抗活性也较好,尤其是XD7a,XD7b的拮抗作用为Ki=1.23μM,证明化合物XD7a的选择性较好,表现出了一定的体外双抗活性。