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目的1.利用血药浓度法,考察芒果苷的吸收与P糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)和多药耐药相关蛋白2(Multidrug resistance associated protein 2, MRP2)的关系。2.采用大鼠在体单向肠灌流的实验动物模型,探讨芒果苷的肠吸收与P-gp和MRP2的相互关系。3.应用MDCK-MDR1细胞单层模型研究P-gp抑制剂对芒果苷吸收的影响。方法1.样品的测定：采用已建立的LC-MS/MS方法对血浆和T.M.溶液中的芒果苷进行含量测定,利用超高效液相色谱法(UPLC-UV)和紫外分光光度法分别检测灌流液中的芒果苷和酚红浓度。2.P-gp和MRP2抑制剂对芒果苷在大鼠体内药动学影响的研究：SD大鼠随机分组,每组6只,予以芒果苷单体、芒果苷单体分别联合盐酸维拉帕米、环孢霉素和吲哚美辛灌胃给药后,定时采血,分离血浆,测定血浆中芒果苷的浓度,用DAS软件计算药代动力学参数,并对芒果苷主要的药动学参数Cmax和AUC进行统计,比较组间的差异。3.芒果苷在体肠吸收的研究：应用单向在体肠灌流实验动物模型,分别灌流芒果苷单体、芒果苷单体联合盐酸维拉帕米、环孢霉素或吲哚美辛,测定灌流液中芒果苷和酚红的浓度,根据校正值计算出芒果苷的表观渗透系数(Peff)和吸收常数(Ka),研究P-gp和MRP2抑制剂对芒果苷肠吸收的影响。4.芒果苷在MDC-MDR1细胞中的研究：应用MDCK-MDRl细胞单层模型,在相同转运条件和相同的芒果苷剂量下,计算出的芒果苷在AP→BL方向和BL→AP方向的Papp值,考察P-gp抑制剂对芒果苷吸收的影响。结果1.P-gp抑制剂对芒果苷的影响(1)大鼠灌胃给予芒果苷单体联合P-gp抑制剂(盐酸维拉帕米和环孢霉素)后,与芒果苷单体组相比,其血药浓度显著升高,达峰时间后延,药动学参数表明芒果苷单体联合P-gp的抑制剂后,其在大鼠体内的药动学行为有显著差异,经软件对所得的主要药动学参数进行分析,其CMAX和AUC经剂量校正后方差分析(ANNOVE)的结果证实,联合盐酸维拉帕米和环孢霉素后,芒果苷的主要药动学参数CMAX和AUC0→∞与单体组比具有统计学差异,推测芒果苷为P-gp的底物。(2)在灌流液中加入了P-gp抑制剂盐酸维拉帕米后,芒果苷的吸收参数Ka和Peff的值均有不同程度的增加。对实验结果进行了单因素方差分析(含LSD),发现在空肠段和回肠段,维拉帕米能显著地增加芒果苷吸收的Ka值和Peff值。加入另一种P-gp抑制剂环孢霉素后,在空肠段,芒果苷的Peff值和Ka值虽有不同程度的升高,但无统计学意义；在回肠段,芒果苷的吸收明显增加,比联合盐酸维拉帕米组作用更明显,推测芒果苷为P-gp的底物。(3)在供试液中加入P-gp抑制剂盐酸维拉帕米或环孢霉素A后,芒果苷的AP→BL方向的Papp均显著性的增加且有统计学意义,外排率(ER)均有不同程度的下降,表明加入了P糖蛋白的抑制剂会显著的影响芒果苷在体内的肠吸收。2.MRP2抑制剂对芒果苷的影响(1)给大鼠单次灌胃芒果苷单体联合MRP2的抑制剂吲哚美辛后,芒果苷的血药浓度有明显增加,芒果苷的达峰时间明显后延,大鼠体内的最大血药浓度CMAX,AUC0-T,AUC0→∞与芒果苷单体组相比有一定的增加,但无统计学意义,芒果苷的达峰时间TMAX从原来的0.55h增加到1.95h,经统计有显著的意义,表明加入MRP2抑制剂有利于芒果苷在体内的吸收。(2)在体单向肠灌流实验中,在空肠段加入MRP2抑制剂吲哚美辛后,与芒果苷单体组比较,芒果苷的Ka和leff值有增加,但差异无统计学意义,提示吲哚美辛对芒果苷的空肠吸收无显著影响。在回肠段加入了吲哚美辛后,芒果苷的吸收参数(Ka值和Peff值)均显著增加(P<0.05),这提示芒果苷是MRP2的底物,加入吲哚美辛后会增加芒果苷的肠吸收。结论本文应用了血药浓度法、在体单向肠灌流模型和MDCK-MDR1细胞单层模型研究芒果苷的吸收与P-gp的关系,实验表明芒果苷的吸收受到P-gp外排的影响,加入P-gp抑制剂(盐酸维拉帕米和环孢霉素)后可以有效提高芒果苷在体内的吸收；同时应用了血药浓度法和单向在体肠灌流模型探讨芒果苷的吸收与MRP2的关系,表明芒果苷在体内的吸收与MRP2关系密切,加入抑制剂吲哚美辛后有利于芒果苷的肠吸收。实验表明芒果苷的生物利用度差与P-gp和MRP2有密切相关,芒果苷为P-gp和MRP2的底物。