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泛素化作为一种重要的翻译后蛋白修饰方式,参与真核生物的多种细胞进程。经典的Lys48多聚泛素化能介导蛋白通过26S蛋白酶体进行降解,而Lys63多聚泛素化则通过非蛋白水解的方式调节蛋白的活性。Ubc13是迄今为止唯一已知能够介导Lys63多聚泛素化的泛素结合酶,它还需要一个Ubc变构体(Uev)作为辅助因子协同作用。在斑马鱼中,Lys63多聚泛素化的存在和功能尚不清楚。
本文阐述了斑马鱼两个ubc13和两个uev的基因克隆和功能分析。基因组结构、核苷酸序列和氨基酸序列分析显示,斑马鱼Ubc13a和Ubc13b在进化中高度保守,并且来源于基因组加倍事件。斑马鱼Ubc13蛋白能够与酵母或者人类的Mms2相互作用。两个ubc13基因都能够弥补酵母ubc13突变体自发突变率高和对DNA诱变剂抵抗力差的功能缺陷。在胚胎发育过程中,斑马鱼ubc13a和ubc13b的表达可以受到DNA损伤剂的诱导,并且主要定位于细胞核中。这些结果显示斑马鱼中Lys63多聚泛素化参与了DNA的损伤耐受途径。
斑马鱼Ubc13s和Uevs属于母源性表达的基因,在整个发育期间都可以检测到其表达,到后期主要集中在前部和胸鳍。斑马鱼ubc13s的敲低能够引起原肠期细胞运动受阻、外包不完全、尾部发育畸形和器官原基向中线汇聚受阻。而这些现象与p53转录活性和依赖此活性的细胞凋亡无关。
总之,Lys63多聚泛素化在进化过程中具有非常保守的功能。斑马鱼Ubc13s和Uevs在DNA损伤耐受途径和胚胎发育过程中起很重要的作用。