淫羊藿苷生物合成中相关转移酶基因的研究

来源 :中国科学院研究生院 中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:passtestall
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
传统中草药淫羊藿为小檗科淫羊藿属植物,异戊烯黄酮醇苷化合物如淫羊藿苷和朝藿定A-C含量甚高。为了研究类黄酮糖基转移酶(flavonoidglycosyltransferase)在黄酮醇苷生物合成中的作用,本实验提取粗毛淫羊藿(Epimedium acuminatum Franeh.)变色期叶片为材料,采用相似性克隆的策略,得到4条类黄酮糖基转移酶基因,分别命名为EaGT1、EaGT2/EaGT2S、EaGT3/EaGT3S和EaGT4。根据氨基酸序列构建进化树显示-EaGT1和EaGT2属于ClusterⅡ,EaGT3属于ClusterⅣ,EaGT4属于ClusterⅢ。半定量RT-PCR显示各基因在茎叶中存在表达差异:EaGT2在茎叶中都有表达,且表达量一致;EaGT3在茎叶中都有表达,但叶中表达量明显高于茎。通过基因组织特异性表达的检测,结合氨基酸序列的进化树分析,推测EaGT3和EaGT4很可能参与淫羊藿类黄酮生物合成中的糖基化反应。采用大肠杆菌异源表达系统,将EaGT基因构建到表达载体pET32a(+)和pET28a(+)中,在表达菌RosettaTM2(DE3)plysS、Rosetta-gamiB(DE3)和BL21(DE3)中只得到包涵体,没有可溶的目标融合蛋白。以包涵体作为粗酶,kaempferol为底物进行酶反应,LC/MS没有检测到目的产物。   以看家基因(Actin)为内标,对来自粗毛淫羊藿的类黄酮异戊烯基转移酶(flavonoid prenyltransferase)疑似基因EaPT1、EaPT2进行组织特异性表达检测。半定量RT-PCR结果证明EaPT1在茎叶中表达量一致,而EaPT2只在叶片中表达。   毛萼香茶菜(Isodon eriocalyx(Dunn) Kudo)中的对映-贝壳杉烯类二萜具有抗菌消炎和抗肿瘤活性,CPS(copalyl pyrophosphate synthase)是参与其生物合成的酶。利用半定量RT-PCR对毛萼香茶菜IeCPS1和IeCPS2在植物不同发育时期的组织特异性表达进行了检测,结果表明IeCPS1既在幼叶中表达显著,也在剐萌发的幼苗和成熟叶中表达;IeCPS2只在叶片中表达,而刚萌发的幼苗不表达。   论文最后综述了近年来植物类黄酮糖基转移酶的研究进展,主要包括糖基转移酶的分类、晶体结构和酶反应机制。
其他文献
随着超大规模集成电路技术和CMOS工艺的发展,数字技术日趋成熟,相应地对模拟信号与数字信号的接口A/D,D/A转换器的要求也不断提高。基于过采样技术的AZ调制器目前广泛地应用于模
语音增强是在带噪语音信号中提取出语音信息的方法,在语音识别与编码、语音通信等领域中有着广泛的应用。因此,语音增强在语音信号处理中扮演着重要的角色。本文对受加性噪声
金属离子如Zn2+、Mn2+等在植物生长发育中起着重要作用,许多金属离子作为酶的辅基对植物的代谢至关重要。金属离子的缺失会引起植物叶绿素降解,但如果金属离子过多同样也会引起
HIV-1包膜蛋白(Env,envelope glycoprotein)表面被寡糖链所覆盖,其上的抗原表位等重要位点被寡糖封闭从而帮助病毒逃脱免疫系统的监视。因此,想要针对Env设计有效的疫苗困难重重
本研究以转SrMV-P1基因甘蔗(TF53, TF64)、空载体转化植株P7(CK1)以及受体品种福农95-1702(CK2)为供试材料,通过生态适应性和土壤环境的安全性等两方面综合评价转基因甘蔗的环境安全。第一、生态适应性主要通过评价甘蔗在逆境下的生存能力来体现。通过对供试材料进行水分胁迫和低温胁迫,分析供试材料在逆境环境下的生理生化响应,进而初步评价转SrMV-P1基因甘蔗的生态适应性变化;第
我国已将生态安全纳入国家安全体系,提升生态安全重要性认识、破解生态安全威胁、构建生态安全屏障,意义重大,影响深远。西南地区是我国重要的生态安全屏障区,同时也是生态高度脆
水稻(Oryza sativa)是世界上最重要的粮食作物之一,同时已成为单子叶植物基因组学遗传和功能研究的模式植物。GAST(Gibberellic Acid-stimulated transcript)家族基因是一类
学位
内蒙古草原是我国北方最重要的自然群落类型,对于维持当地的生态平衡和社会经济的可持续发展起着重要的作用。近半个世纪以来,由于人类在该地区的过度放牧以及将草原开垦为农田
目的评价肠镜下泡沫硬化剂注射治疗出血性内痔的安全性及有效性。方法前瞻性纳入2017年3月至2018年3月连续就诊的Ⅰ期出血性内痔成年(18~60岁)患者,随机数字表法分为泡沫硬化剂组(FS)和液体硬化剂组(LS)。透明帽辅助肠镜下行痔核内泡沫硬化剂或液体硬化剂注射治疗。结果共纳入患者108例,年龄(44.0±7.6)岁,男性62例(57.4%)。FS组55例,LS组53例,2组在性别、年龄、体重指