论文部分内容阅读
本研究以银黄可溶性粉作为研究对象,通过体外抑菌试验探究其对猪链球菌的体外抑菌效果,并采用生长曲线绘制、蛋白质测定、电镜观察等方法揭露其抑菌机理;再通过接种耐药链球菌于大鼠上,对采集的样本进行观察、血常规等指标的测定,探究银黄可溶性粉对耐药链球菌感染的预防作用;最后通过单独和同时添加银黄可溶性粉、黄芪多糖粉到哺乳母猪的基础日粮中,考察哺乳母猪及断奶仔猪的多项指标,以评价银黄可溶性粉对哺乳母猪生产性能的影响。在临床分了5株猪链球菌临床分离株中选择对常用药物敏感和耐药的菌株各一,编码分别为05ZYH33、CZ130902,采用牛津杯法分别对筛选出的敏感菌和耐药菌以及标准菌进行体外抑菌试验,每种菌3个重复,筛选出各菌的最佳药物浓度;分别取标准菌和敏感菌MIC的0倍和1倍,以及耐药菌MIC的0倍、1/4、1/2、1倍进行生长曲线绘制试验,共8个组,每隔1.5 h利用酶标仪在600 nm处测定OD值,根据测得的OD值计算出实际菌液OD值后绘制3种菌的生长曲线,在生长曲线测定第11 h时取各菌液分别测定白蛋白(ALB)和碱性磷酸酶(AKP)的OD值,第14 h时进行电镜观察。结果表明:在5株临床菌分出2株链球菌,采用牛津杯法进行体外抑菌试验后筛选出各菌的最佳药物浓度均为800 mg/m L;测得链球菌(1)、链球菌(4)和标准菌的MIC分别为25mg/m L、25 mg/m L、12.5 mg/m L,MBC分别为50 mg/m L、25 mg/m L、12.5 mg/m L;随着时间的推移,各菌OD值均增加,药物浓度越高,对细菌生长的推迟作用越强;在链球菌(1)和标准菌中,加入药液可使ALB和AKP均增加,链球菌(4)在12.5 mg/m L药液中的ALB、AKP含量最高,在6.25 mg/m L中最低;电镜图显示,未加药的细菌菌体边界清楚,个体独立,而加药的细菌菌膜破裂,失去原有的形态,细菌间相互粘连,且链球菌(4)细胞膜破损程度与药物浓度呈梯度依赖性,随着药物浓度的增加,细胞膜破损愈严重,在12.5 mg/m L时,链球菌(4)抑制效果最为明显。由此可见,银黄可溶性粉对猪耐药链球菌具有抑制作用,其作用途径之一为损伤细菌的胞膜,药液最低有效浓度为12.5 mg/m L。研究银黄可溶性粉对大鼠实验室感染链球菌的预防和治疗效果:本试验设空白对照组、银黄可溶性粉组以及清瘟解毒口服液组,共3组,每个组20只体重相近的SD大鼠,连续给药7 d后以滴鼻方式接种链球菌,继续给药,接种后第6d处死大鼠并进行临床症状和组织切片观察、测定血常规及血清生化指标等。结果表明:各组大鼠在感染后2-3 d未见异常表现,第4 d起均出现链球菌病的临床症状;各组大鼠肺脏病变强度的比较中,银黄可溶性粉组与对照组的差异有显著性意义(P<0.05),而与清瘟解毒口服液组的差异无显著性意义(P>0.05);各试验组血常规指标(WBC、HCT、PLT)与对照组的差异存在显著性意义(P<0.05);各试验组血清生化指标(BUN、CREA、ALT、AST)与对照组的差异存在显著性意义(P<0.05)。由此可见,银黄可溶性粉对链球菌的感染具有良好的预防及治疗效果。在哺乳母猪日粮中使用银黄可溶性粉观察其对母猪生产与常见抗体的影响:本试验设A组(空白对照)、B组(银黄可溶性粉)、C组(黄芪多糖粉)、D组(银黄可溶性粉+黄芪多糖粉),共4个组,每个组20头二元杂交母猪,于分娩后在饲喂基础日粮的基础上开始给药,试验期为21 d,仔猪正常饲养并于21 d时断奶。试验期间观察哺乳母猪和仔猪的日常状态,在母猪分娩后取发病母猪子宫分泌物,进行涂抹玻片并染色,以及接种于血琼脂培养基和血清肉汤培养基中,鉴定其病原体;试验结束后统计各组的仔猪断奶成活率、断奶窝均重和断奶个体重,同时记录母猪采食、体重变化、发情和阴道分泌物状态等情况。另外,在每组中随机选取10头母猪,于分娩后第1、11、21 d进行前腔静脉采血,利用ELISA方法检测其血清中猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的抗体值。结果表明:母猪分娩后,胎衣排出正常,于分娩后第3 d起开始陆续排出子宫分泌物,经鉴定其中含有猪链球菌,而仔猪的生长状态良好,未发生烈性疫病;各组断奶成活率B组最低,为92.66%,C组最高,为97.93%,A、D组分别为95.03%和96.83%,断奶窝均重比较,A、B组显著低于C、D组(P<0.05),断奶个体重A组显著低于其他各组(P<0.05);各剂量组采食情况与对照组的差异存在显著性意义(P<0.05),母猪产前产后体重损失率A组最高,为18.72%,而其余3组依次为16.83%、16.20%、16.13%,显著低于A组(P<0.05),背膘损失率也是A组最高,为1.33%,其余3组为1.29%、1.24%、1.27%,同样显著低于A组(P<0.05),各组母猪断奶7d内发情天数比较,A、B组显著高于C、D组(P<0.05),发情率A组最低,为70%,C组最高,为100%,B、D组均为90%;各试验组CSFV抗体指数在第1、2次检测时的差异并不显著(P>0.05),但到第3次检测时各试验组显著高于对照组(P<0.05),而PRRSV抗体指数检测结果显示C组在第2、3次检测时均显著高于A组(P<0.05)。由此可见,试验组在基础日粮中单独添加银黄可溶性粉、黄芪多糖粉或同时添加两种药物,均可降低母猪生殖道感染链球菌病造成子宫内膜炎的几率,并且能够增强哺乳母猪的生产性能,提高仔猪的断奶重;另外,同时添加银黄可溶性粉和黄芪多糖粉,能够明显提高哺乳母猪血清中CSFV和PRRSV的抗体水平,初步证实在母猪哺乳期间于基础日粮中添加银黄可溶性粉,是一种安全、有效、无抗的保健方式,能够改善母猪的身体健康状况并增强其生产性能。银黄可溶性粉对猪耐药链球菌具有抑制作用,破坏其胞膜是发挥抑制作用的途径之一,对猪链球菌的感染具有良好的防治功效,以及能够改善哺乳母猪的链球菌感染导致子宫内膜炎症情况及猪瘟、蓝耳抗体水平。