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目的：乳腺癌是女性最常见的癌症和导致女性癌症死亡的首要原因。肿瘤转移和复发是癌症的死亡率高的主要原因。肿瘤干细胞(Cancer Stem Cells，CSCs)是一类能够自我更新和再生肿瘤的细胞，肿瘤干细胞的存在是肿瘤复发和转移的最常见原因。因此，识别调控自我更新的关键分子可能有助于发掘针对乳腺癌转移复发的治疗策略。
TIMELESS(TIM)是一种进化上的保守蛋白，在调控生理节律上发挥着重要的作用。TIM被证实是一种复制叉相关因子，与TIM相互作用蛋白(Tipin)形成稳定的复合体并影响DNA复制。例如，TIM-Tipin复合物可以稳定复制叉和促进姐妹染色单体聚合。此外，TIM-Tipin复合物可直接活化DNA解旋酶和DNA聚合酶(POLα，δ，和ε)，调节DNA解螺旋和合成。
最近文献报道TIM在膀胱癌、肺癌、肝癌、转移性前列腺癌、乳腺癌等多种肿瘤中表达上调，参与了肿瘤的发生和发展。TIM表达变化与乳腺癌较晚分期和预后不良有关。然而，TIM在乳腺癌的发展过程中的确切作用还没有完全阐明。本研究旨在验证TIM表达对乳腺癌发展的作用和进一步探讨其分子机制。
方法：采用免疫组织化学染色法检测231例乳腺癌标本中TIM的表达水平，分析乳腺癌组织中TIM的蛋白表达水平对乳腺癌的生存期是否有影响。分别构建TIM过表达和沉默乳腺癌细胞株，采用肿瘤球形成实验和干细胞侧群分析研究TIM对乳腺癌干细胞的自我更新能力的影响，通过划痕愈合实验和Transwell小室实验研究TIM在乳腺癌细胞迁移和侵袭中的作用。通过体外软琼脂生长试验和裸鼠体内成瘤实验研究TIM对乳腺癌细胞致瘤作用的影响。
统计：采用SPSS17进行统计学分析。
结果：以平均数±标准差表示，各组实验至少重复三次。采用t检验(twotailed)统计分析各组之间的差异和意义。通过Kaplan-Meier生存分析勾画生存曲线，分析TIM表达水平与患者总生存期的关系，采用Cox回归模型的临床多因素分析TIM表达水平与临床患者病理特征的相关性。
结果：TIM乳腺癌细胞株和组织中表达水平均有显著上调。TIM高表达乳腺癌患者比TIM低表达患者预后差。乳腺癌细胞体外培养研究显示，TIM过表达可显著增强乳腺癌肿瘤干细胞的自我更新、细胞侵袭和迁移能力，而TIM沉默后能力受到抑制。此外，TIM过表达显著增强乳腺癌细胞在裸鼠体内的成瘤能力，而敲除TIM后乳腺癌细胞在裸鼠体内的成瘤能力下降。机制研究表明TIM能够促进原癌基因MYC的转录活性和上调其表达水平，MYC抑制剂可显著阻断TIM对肿瘤干细胞数目、细胞侵袭力和锚定非依赖性生长能力的影响。
结论：TIM在乳腺癌的发生发展中起重要作用，可能是为乳腺癌提供新的治疗靶点。
TIMELESS(TIM)是一种进化上的保守蛋白，在调控生理节律上发挥着重要的作用。TIM被证实是一种复制叉相关因子，与TIM相互作用蛋白(Tipin)形成稳定的复合体并影响DNA复制。例如，TIM-Tipin复合物可以稳定复制叉和促进姐妹染色单体聚合。此外，TIM-Tipin复合物可直接活化DNA解旋酶和DNA聚合酶(POLα，δ，和ε)，调节DNA解螺旋和合成。
最近文献报道TIM在膀胱癌、肺癌、肝癌、转移性前列腺癌、乳腺癌等多种肿瘤中表达上调，参与了肿瘤的发生和发展。TIM表达变化与乳腺癌较晚分期和预后不良有关。然而，TIM在乳腺癌的发展过程中的确切作用还没有完全阐明。本研究旨在验证TIM表达对乳腺癌发展的作用和进一步探讨其分子机制。
方法：采用免疫组织化学染色法检测231例乳腺癌标本中TIM的表达水平，分析乳腺癌组织中TIM的蛋白表达水平对乳腺癌的生存期是否有影响。分别构建TIM过表达和沉默乳腺癌细胞株，采用肿瘤球形成实验和干细胞侧群分析研究TIM对乳腺癌干细胞的自我更新能力的影响，通过划痕愈合实验和Transwell小室实验研究TIM在乳腺癌细胞迁移和侵袭中的作用。通过体外软琼脂生长试验和裸鼠体内成瘤实验研究TIM对乳腺癌细胞致瘤作用的影响。
统计：采用SPSS17进行统计学分析。
结果：以平均数±标准差表示，各组实验至少重复三次。采用t检验(twotailed)统计分析各组之间的差异和意义。通过Kaplan-Meier生存分析勾画生存曲线，分析TIM表达水平与患者总生存期的关系，采用Cox回归模型的临床多因素分析TIM表达水平与临床患者病理特征的相关性。
结果：TIM乳腺癌细胞株和组织中表达水平均有显著上调。TIM高表达乳腺癌患者比TIM低表达患者预后差。乳腺癌细胞体外培养研究显示，TIM过表达可显著增强乳腺癌肿瘤干细胞的自我更新、细胞侵袭和迁移能力，而TIM沉默后能力受到抑制。此外，TIM过表达显著增强乳腺癌细胞在裸鼠体内的成瘤能力，而敲除TIM后乳腺癌细胞在裸鼠体内的成瘤能力下降。机制研究表明TIM能够促进原癌基因MYC的转录活性和上调其表达水平，MYC抑制剂可显著阻断TIM对肿瘤干细胞数目、细胞侵袭力和锚定非依赖性生长能力的影响。
结论：TIM在乳腺癌的发生发展中起重要作用，可能是为乳腺癌提供新的治疗靶点。