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目的:研究短发夹RNA(sh RNA)干扰PKHD1对人肝内胆管癌Hucct-1细胞增殖和侵袭转移的影响,并分析PKHD1基因沉默在介导人肝内胆管癌细胞增殖及侵袭转移中可能的分子机制。方法:设计能有效抑制人肝内胆管癌PKHD1表达的sh RNA序列,并构建重组慢病毒PKHD1-sh RNA(LV3-PKHD1,LV3NC),继而分别侵染Hucct-1细胞。运用q RT-PCR和Western Blot检测PKHD1 m RNA和蛋白的表达,验证PKHD1的沉默效应;Western Blot检测各组细胞中凋亡信号通路PI3K、Akt、p Akt、NF-κB等蛋白的表达;CCK8法检测Hucct-1细胞增殖状况;细胞划痕实验、Transwell细胞迁移试验/侵袭试验检测细胞迁移和侵袭能力;扫描电子显微镜观察稳定沉默PKHD1后Hucct-1细胞表面初级纤毛形态变化。结果:PKHD1基因沉默后,Hucct-1细胞的PKHD1 m RNA和蛋白水平显著降低降低(P<0.01),下游PI3K、p-Akt、NF-κB表达水平显著增高(P<0.05)。沉默组中细胞的增长明显快于阴性对照组和空白对照组(P<0.01),而对照组间没有显著差异(P>0.05)。细胞划痕实验中,PKHD1基因沉默后的细胞迁移速度增快。沉默组中穿过transwell小室的细胞数较阴性对照组和空白对照组显著增加(P<0.01),而对照组间没有显著差异(P>0.05)。在扫描电镜下,Hucct-1细胞表面的初级纤毛在PKHD1基因沉默后长度变短,数量变少。结论:在Hucct-1细胞中靶向沉默PKHD1的表达能显著促进人肝内胆管癌细胞的增殖和侵袭迁移能力,这种效应可能是由PI3K/Akt通路的激活产生。沉默PKHD1的表达能引起Hucct-1细胞表面初级纤毛长度,数量的变化,纤毛结构和功能异常可能是促使胆管上皮细胞发展成胆管癌的间接原因。