同源四倍体和二倍体青花菜花粉母细胞减数分裂及雄配子体发育比较研究

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本论文以同源四倍体青花菜为材料,以二倍体为对照,系统的进行了染色体制片技术、花粉母细胞减数分裂行为及雄配子体发育的研究,为多倍体青花菜的遗传育种奠定理论基础并提供理论指导。1.染色体制片技术研究二、四倍体青花菜花粉母细胞染色体制片技术,发现两种倍性对取材的要求不同;卡诺固定液固定24h有利于提高制片质量;用卡宝品红染色,结合火焰微烤,可以提高分色效果。研究发现,爱氏苏木精染色24~36h,再用冬青油透明,是观察青花菜雄配子体发育的最佳处理方法,可以非常清晰的显示出两次有丝分裂的动态过程。以萌发种子根为材料,研究根长、预处理方法和酸解离时间对青花菜有丝分裂染色体制片的影响。结果表明,长0.6~1.2cm、生长健壮的根细胞分裂指数最高;0.002M 8-羟基喹啉预处理3h,1N HCl 60℃解离8~10min的效果最佳。2.花粉母细胞减数分裂以同源四倍体青花菜为材料,以相应的二倍体为对照,采用常规压片法研究花粉母细胞减数分裂行为,结果表明:经秋水仙素诱导的同源四倍体青花菜花粉母细胞减数分裂与二倍体类似,细胞质的分裂方式属同时型,四分体的排列方式为正四面体或十字交叉型。但同源四倍体青花菜花粉母细胞减数分裂有其特殊性。主要表现在:中期Ⅰ染色体的构型复杂,有多价体、四价体、三价体、二价体和单价体;中期Ⅰ和中期Ⅱ有赤道板外染色体;后期Ⅰ和后期Ⅱ出现落后染色体、染色体桥及断片;后期Ⅱ和末期Ⅱ还出现染色体分离不同步及不等分裂的现象;四分体时期出现二分体、三分体、含微核的异常四分体及多分体。同源四倍体花粉母细胞减数分裂平均异常频率高达31.5%,二倍体则只有10.2%的细胞表现异常,表明同源四倍体遗传稳定性比二倍体差。对其花粉进行人工萌发试验,花粉萌发率只有46.2%,说明减数分裂异常是同源四倍体青花菜花粉育性低的细胞学原因。3.雄配子体发育过程利用“爱氏苏木精染色—冬青油透明”技术,观察了同源四倍体青花菜(2n=4x=36)雄配子体的动态发育过程。结果表明:同源四倍体青花菜与相应的二倍体在雄配子的整个发育过程上表现相似;细胞核经一次有丝分裂产生营养核与生殖核,生殖核再经一次有丝分裂形成两个精核,最终形成3-细胞的成熟花粉粒,具4个或3个萌发孔;雄配子体发育过程中异常频率为12.14%,是同源四倍体青花菜花粉育性降低的重要原因,败育主要发生在单核期。
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