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动脉粥样硬化被认为是由内皮损伤启动的一种动脉壁慢性炎性病变,有研究表明,巨细胞病毒(Cytomegalovirus,CMV)感染可能在动脉粥样硬化形成、进展中起着重要作用。病例对照研究显示早期动脉粥样硬化患者颈动脉内膜—中膜增厚与血清CMVIgG抗体存在显著的相关性。凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(lectin-likeoxidizedlowdensitylipoproteinreceptor-1,LOX-1)是一种新型的氧化低密度脂蛋白(oxidizedlowdensitylipoprotein,oxLDL)受体,它可以内吞oxLDL,介导内皮损伤,从而在动脉粥样硬化中起着重要作用。金属基质蛋白酶-2(matrixmetalloproteinase-2,MMP-2)是金属基质蛋白酶家族的一员,可以降解细胞外基质,促使炎症细胞浸润以及平滑肌细胞迁移,从而在动脉粥样硬化形成中起着重要作用。关于CMV感染对内皮细胞LOX-1、MMP-2表达的影响以及CMV感染对晚期动脉粥样硬化患者颈总动脉内膜—中膜厚度(intima-mediathickness,IMT)影响的研究目前罕见报道。本实验目的在于:(1)观察CMV感染对LOX-1以及MMP-2表达的影响,以探讨CMV致动脉粥样硬化的可能机制;(2)观察CMV感染对脑梗塞患者颈总动脉IMT的影响。
方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,以CMV分别感染3-6代细胞6、12、24小时。逆转录多聚酶链反应(reversetranscriptionpolymerasechainreaction,RT-PCR)检测LOX-1及MMP-2mRNA表达,凝胶酶谱法(Zymography)检测MMP-2活性变化。
以脑梗塞患者为研究对象,酶联免疫吸附试验(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)检测血清CMVIgG抗体,彩色多普勒超声测定颈总动脉IMT,比较CMVIgG阳性及阴性患者在年龄、男性性别、吸烟、高血压、糖尿病、高血脂等临床特征方面的构成以及颈总动脉IMT差异。
实验结果:CMV感染6小时LOX-1及MMP-2mRNA表达同对照比无显著性差异,CMV感染12小时、24小时LOX-1及MMP-2mRNA表达同对照相比明显增强。CMV感染6小时分泌至培养基中的MMP-2活性与对照比无明显差异,而病毒感染12小时、24小时MMP-2活性明显增强。
ELISA显示70例脑梗塞患者中,51例(73%)CMVIgG阳性,19例(28%)CMVIgG阴性。按ELISA测定结果将患者分为CMVIgG阳性组及阴性组。两组患者在年龄、男性性别、高血压、糖尿病、高血脂、吸烟等构成方面基本相同,彩色多普勒超声血管检查显示70例患者平均颈总动脉IMT为1.42mm,其中CMVIgG阳性组平均IMT为1.48mm,CMVIgG阴性组平均IMT为1.24mm,统计表明两组间有显著性差异。
结论:
1.CMV感染上调人内皮细胞LOX-1mRNA表达。
2.CMV感染上调人内皮细胞MMP-2mRNA表达,凝胶酶谱法显示MMP-2活性亦增强。
3.CMVIgG阳性脑梗塞患者颈总动脉IMT较阴性患者增厚。