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目的：了解本地区肺炎克雷伯氏菌产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)情况及CTX-M型ESBLs基因型分布；分析产ESBLs肺炎克雷伯氏菌耐药性及其耐药特点。
方法：
1．纸片扩散法(Kerby-Bauer法，K-B法)：采用美国国家临床实验室标准委员会(NCCLS)推荐的K-B法，检测102株肺炎克雷伯氏菌对15种抗生素的耐药性。
2．初步筛选试验(screening test)：选用头孢噻肟、头孢他定、氨曲南、头孢曲松、头孢泊肟药敏纸片，凡头孢泊肟或头孢他定的抑菌环直径≤22 mm；头孢曲松≤25 mm；氨曲南或头孢噻肟≤27 mm；提示这些菌株为可疑ESBLs产生株，进一步作确证试验。
3．纸片确证试验(confirmatory test)：将初筛可疑产ESBLs菌株同时用头孢他定和头孢他定加克拉维酸、头孢噻肟和头孢噻肟加克拉维酸作药敏试验，对任何一组药物，加克拉维酸比不加克拉维酸的抑菌环直径≥5 mm可确证为产ESBLs菌株。上述三种试验均用肺炎克雷伯氏菌标准菌株ATCC700603作质控。
4．PCR：检测确证试验阳性的菌株携带的ESBLs基因型。根据blaCTX-M的序列设计四对引物，采用UNIQ-10柱式质粒小量抽提试剂盒提取质粒DNA用于PCR反应模板。各标本分别使用四对设计好的引物扩增，CTX-M-Ⅰ组、CTX-M-Ⅱ组、CTX-M-Ⅲ组、CTX-M-Ⅳ组阳性扩增片段长度分别为499bp、351bp、307bp、474bp。扩增产物进行凝胶电泳，紫外线检测仪观察结果并照相。
结果：
1．受检的102株肺炎克雷伯氏菌对15种抗生素的药敏结果显示，对氨苄西林的耐药率最高，为87.25％；哌拉西林、头孢唑啉次之，耐药率分别是59.80％、53.92％；对头孢曲松、头孢噻肟、头孢泊肟、氨曲南、环丙沙星的耐药率分别是42.16％、42.16％、37.25％、36.27％、34.31％；对氨苄西林/舒巴坦、阿米卡星的耐药率分别是22.55％、21.57％；对头孢他定、头孢吡肟的耐药率分别为16.67％、14.70％；对头孢西丁耐药率9.80％、哌拉西林/三唑巴坦的耐药率为6.86％：所有菌株对亚胺培南敏感，耐药率为0。
2．初筛结果有65株可疑产ESBLs菌株，进一步经纸片确证试验有38株(37.25％)产ESBLs 菌。其中头孢噻肟与头孢噻肟/克拉维酸组药物检出38(100％)株产ESBLs菌株，而用头孢他定与头孢他定/克拉维酸组检出22(57.89％)株产ESBLs菌株，二者相比有显著差异(x2检验，P<0.01)。
3．产ESBLs与非产ESBLs肺炎克雷伯氏菌株对亚胺培南全部敏感；产ESBLs菌对哌拉西林/三唑巴坦耐药率为10.53％，与非产ESBLs的细菌相比无差异(x2检验，P>0.05)：对头孢西丁的耐药率为18.42％，与非产ESBLs的细菌相比有差异(x2检验，P<0.05)；对头孢吡肟、头孢他定、阿米卡星、氨苄西林/舒巴坦、环丙沙星、氨曲南、头孢泊肟、头孢曲松、头孢噻肟、头孢唑啉、哌拉西林的耐药率明显高于非产ESBLs菌株，产ESBLs细菌与非产ESBLs细菌相比有显著差异(X2检验，P<0.01)；产ESBLs菌株对氨苄西林全部耐药，非产ESBLs菌株对氨苄西林耐药率为79.69％，二者相比有差异(X2检验，P<0.05)。
4.38株产ESBLs菌株的PCR扩增后电泳结果显示CTX-M型18株(47.37％)，其中5株(27.78％)细菌扩增出CTX-M-Ⅰ组酶(499bp)：3株细菌(16.67％)扩增出CTX-M-Ⅱ组酶(351bp)；第Ⅲ组引物尚未扩增出阳性标本；11株细菌(61.11％)扩增出CTX-M-Ⅳ组酶(474bp)：1株细菌同时扩增出CTX-M-Ⅰ组酶和CTX-M-Ⅳ组酶。
结论：
1．本地区肺炎克雷伯氏菌对青霉素类抗生素耐药率很高，对大部分头孢菌素类、单环β-内酰胺类抗生素以及环丙沙星存在不同程度的较高耐药，对氨苄西林/舒巴坦、阿米卡星、头孢西丁、哌拉西林/三唑巴坦的耐药率较低，对碳青霉烯类高度敏感。
2．本地区肺炎克雷伯氏菌产ESBLs菌株流行严重。
3．产ESBLs细菌对常用抗生素的体外抗菌活性明显高于非产ESBLs细菌，但对碳青霉烯类高度敏感。
4．本地区肺炎克雷伯氏菌产CTX-M型ESBLs常见，且以CTX-M-IV组酶为主。