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第一章竹柏内酯B抗动脉粥样硬化的机制研究 动脉粥样硬化是心血管疾病的主要病理基础，会引起心肌梗死或者脑卒中等严重的疾病。促进胆固醇外流是一种有潜力的治疗动脉粥样硬化的途径。本研究的目的是通过在细胞水平的实验，探究小分子化合物竹柏内酯B抑制巨噬细胞中的胆固醇堆积的作用，进而在动物水平评价其抗动脉粥样硬化的作用，并且通过进一步的实验，探究其抗动脉粥样硬化的机制。 本研究首先在小鼠巨噬细胞上，通过油红O染色考察竹柏内酯B对胆固醇堆积的影响，通过[3H]标记胆固醇考察了对胆固醇外流的影响。进一步通过免疫印迹和荧光定量PCR的方法在小鼠和人单核巨噬细胞上考察了竹柏内酯B对ATP-结合转运蛋白A1和G1的影响。随后我们构建了ABCA1启动子区域的野生型和突变型的pGL3-basic质粒，采用荧光素酶报告基因体系探究竹柏内酯B的作用位点，并且通过小干扰RNA的方法进行了验证。最后，通过口服给药12周的方式在雄性apoE基因敲除鼠模型上考察其抗动脉粥样硬化的效果。通过免疫荧光实验考察了竹柏内酯B对ABCA1体内表达的效果。并使用生化分析仪测定了小鼠的血脂水平，通过脂质含量的测定观察竹柏内酯B对肝脏、小肠和粪便中脂质含量的影响。 实验结果表明，竹柏内酯B可以显著降低巨噬细胞中的胆固醇堆积，并且这种效果主要是通过促进ABCA1的表达来完成的。萤光素酶报告基因和小干扰RNA实验结果显示，竹柏内酯B的这种作用主要是通过LXR介导的。体内实验结果显示，竹柏内酯B可以剂量依赖地抑制apoE小鼠中动脉粥样硬化的面积。与体外实验结果一致，竹柏内酯B可以显著升高斑块处ABCA1的表达。同时，竹柏内酯B不会引起肝脏的脂质堆积，并且具有改善循环中和肝脏中脂质水平的作用。 综上所述，竹柏内酯B是一种选择性的LXR调节剂，具有显著的抗动脉粥样硬化的作用。在巨噬细胞中通过升高LXR介导的ABCA1表达，促进巨噬细胞的胆固醇外流。而对肝细胞中的没有促进LXR的作用。这些结果对后续的药物研发提供了宝贵的理论基础。 第二章白桦酯醇抗动脉粥样硬化的机制研究 巨噬细胞吞噬过多的胆固醇转变成泡沫细胞是引起动脉粥样硬化的起始步骤，所以缓解或者逆转这一过程是治疗动脉粥样硬化的重要手段。白桦酯醇是一种具有广泛药理活性的小分子化合物。本研究的目的是通过小鼠巨噬细胞模型评价白桦酯醇对巨噬细胞胆固醇堆积的效果，进一步评价了其抗动脉粥样硬化的效果，并探究其抗动脉粥样硬化的机制。 本研究首先通过油红染色的方法评价白桦酯醇对胆固醇堆积的作用。进一步采用[3H]标记胆固醇考察了白桦酯醇对胆固醇外流过程的作用。通过免疫印迹和荧光定量PCR的方法考察了对胆固醇外流转运蛋白ABCA1和ABCG1的作用。机制实验通过构建ABCA1启动子突变的萤光素酶报告基因考察介导这一过程的位点。最后，在小鼠动脉粥样硬化模型上评价白桦酯醇的抗动脉粥样硬化的效果，并且探究其中的机制。 实验结果表明，白桦酯醇可以剂量依赖的抑制巨噬细胞的胆固醇堆积，并且这种作用主要是通过促进巨噬细胞的胆固醇外流完成的。机制实验表明，白桦酯醇可以显著升高ABCA1和ABCG1的基因和蛋白的表达。启动子突变实验表明，这种作用主要是通过启动子区域内的E-box位点完成的。这主要是通过抑制与启动子E-box区域结合的胆固醇调节元件结合蛋白(SREBP)完成的。在apoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化模型上，白桦酯醇可以剂量依赖的发挥抗动脉粥样硬化的作用。免疫荧光实验结果显示了，白桦酯醇可以显著升高斑块处ABCA1的表达。同时，白桦酯醇具有一定的降血脂活性。 综上所述，白桦酯醇具有显著的抑制巨噬细胞胆固醇堆积的效果。并且这种效果主要通过促进ATP-结合转运蛋白表达实现的。动物实验的结果表明白桦酯醇具有显著的抗动脉粥样硬化的效果，是一个具有开发潜力的化合物。