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本论文对蜜环菌多糖进行了提取、分离和纯化,得到了两种多糖成分AMP-1、AMP-2,并对AMP-1进行了研究。研究的内容如下: 蜜环菌多糖的提取、分离和纯化:蜜环菌菌索打粹后,进行水提,经过醇沉、浓缩合并上清,最后经过DEAE-纤维素柱色谱(cl-1型)分离,得到了2种多糖成分AMP-1、AMP-2.采用苯酚-硫酸法,测得AMP-1为均一组分,AMP-2有两种组分。 蜜环菌多糖对损伤性大鼠胰岛细胞(INS-1)的分泌功能的影响:通过倒置显微镜对各实验组细胞进行了形态学观察;通过MTT法对四氧嘧啶损伤浓度和时间进行了优化;用AXN损伤细胞,培养液中加入不同浓度的AMP-1(50、100、200、300、400、500mg·L-1),用MTT法探讨了AMP-1对AXN损伤的大鼠胰岛细胞的活性影响;使用放免法检测不同浓度AMP-1对INS-1细胞葡萄糖刺激的胰岛素和C肽的分泌量。结果如下:四氧嘧啶损伤最佳浓度是4mmol·L-1,10h;AMP-1可减少AXN对INS-1细胞的损伤,AMP-1处理组的INS-1细胞存活率增加;AMP-1对AXN损伤胰岛细胞的分泌胰岛素和C肽均有一定的促进作用,尤其是在葡萄糖刺激浓度较高时(16.7 mmol·L-1),促分泌作用显著。 蜜环菌多糖对损伤性大鼠胰岛细胞(INS-1)的分泌功能的影响机制的研究:培养大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1),以AXN损伤细胞,培养液中加入不同浓度的 AMP-1(100、300、500mg·L-1),提取各组细胞总蛋白,对其中的GLUT2进行印迹杂交。结果表明:对照组GLUT2蛋白的表达相对较高,而AXN损伤组表达量明显减少,当加入一定量的AMP-1作用后GLUT2蛋白的表达量有所升高,因此,本实验推测AMP-1通过促进胰岛细胞GLUT2蛋白的表达从而有助于葡萄糖转运入胰岛β细胞,促进葡萄糖的代谢,引起胰岛细胞外Ca2+内流而起到促胰岛素释放的作用。