【摘 要】
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该研究从广东省两个发生呼吸道病的猪场送检的病料和棉签拭子中分离到两株病毒,经初步鉴定为SIV.病毒纯化后送国家流感中心进行H及N亚型的鉴定,结果两株为H3N2亚型毒株,命名
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该研究从广东省两个发生呼吸道病的猪场送检的病料和棉签拭子中分离到两株病毒,经初步鉴定为SIV.病毒纯化后送国家流感中心进行H及N亚型的鉴定,结果两株为H3N2亚型毒株,命名为A/Swine/Guangdong/1/2003(H3N2)(以下简称为SGD2)、A/Swine/Guangdong/2/2003(H3N2)).SGD2株生物学特性方面的研究结果表明,病毒的组织培养半数感染量(TCID50)、鸡胚半数感染量(EID50)、感染一个病毒最小致死量的鸡胚平均死亡时间(MDT)分别为10<-6.5>/0.2mL、10<-7.3>/0.2mL、99h;病毒以滴鼻途径感染小白鼠,小白鼠出现流感的临床症状,血清中出现特异性抗体;病毒以滴鼻、肌肉注射途径感染60d实验猪,猪只仅表现出流感的临床症状,未发生死亡,血清中均可检测到特异性抗体.利用自行设计的13对引物,通过RT-PCR方法扩增出SGD2株HA、NA、M、NS、NP、PA、PB1和PB2基因,然后分别将其克隆到pMD 18-T载体中.成功获得了H3N2病毒全基因的序列.氨基酸序列分析发现HA、NA、PA、PB1有多个位点与所比较的序列不同.系统发育进化树表明,SGD2株与大多数香港、北美的H3亚型人及猪流感病毒分离株的亲缘关系较近.分析表明SGD2株HA蛋白切割位点氨基酸组成不符合高致病力AIV毒株分子特征.SGD2株传代从F1至F50代,其效价都稳定.BEI灭活试验表明1%BEI可使H3N2-SIV的绒毛尿囊液在室温下36h完全灭活.将病毒灭活后作为抗原,制备了H3N2单价油乳剂疫苗,并对疫苗安全性、物理性状、保存期、免疫效果及抗体水平消长规律进行了检测.结果表明,仔猪免疫后无不良反应.一免3w后仔猪抗体水平等于或大于160;用相同的毒株攻毒,在48h和72h后没有分离到病毒;疫苗一免抗体水平在6w后达到高峰,6个月后仍然在阳性水平以上.二免7个月后仍然保持高水平的抗体;疫苗在4℃下保存6个月和12个月,性状没有发生改变,疫苗仍然安全有效.
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