扇贝裙边糖胺聚糖对6-OHDA诱导SH-SY57细胞氧化应激与凋亡的保护机制研究

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目的:研究扇贝裙边糖胺聚糖(SS-GAG)对6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的人神经母瘤细胞株SH-SY5Y丙二醛(MDA)含量、乳酸脱氢酶(LDH)活性、早期凋亡率以及凋亡相关基因Bax、Bcl-2与蛋白Cyt C、Caspase-9表达的影响,探讨SS-GAG保护多巴胺能神经元的作用机制。  方法:体外培养SH-SY5Y细胞,随机分为对照组、6-OHDA损伤组和6-OHDA+SS-GAG(200、400和800μg/ml)处理组。测定细胞中MDA含量和LDH活性,AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,实时荧光(real-time) PCR检测细胞Bcl-2、Bax mRNA表达的变化,蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测胞质内细胞色素C(CytC)的蛋白释放量,流式细胞技术(FCM)检测活化Cappase-9蛋白表达量。  结果:与对照组相比,6-OHDA损伤组的MDA含量增加,LDH活性增高,早期凋亡率升高,Bcl-2 mRNA表达降低,Bax mRNA表达升高,胞质内Cyt C释放量增多,表达活化Caspase-9蛋白的细胞数增加,各项指标均存在显著差异(P<0.01),损伤效果明显。加入SS-GAG后,与6-OHDA损伤组比较,SH-SY5Y细胞中MDA含量减少,LDH活性降低,细胞早期凋亡率降低,Bcl-2 mRNA表达升高,Bax mRNA表达降低,胞质内Cyt C蛋白含量减少,活化的Caspase-9蛋白表达量减少。  结论: SS-GAG能降低6-OHDA诱导SH-SY5Y细胞的氧化应激水平。通过上调Bcl-2基因的表达和下调Bax基因的表达,抑制Cyt C从线粒体释放到胞质内,进而减少Caspase-9蛋白的活化,最终抑制6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞凋亡。
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