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中国水仙(Narcissus tazetta var.chinensis)属石蒜科水仙属,属于法国多花水仙的变种,主要生产在上海、浙江、福建等地,其中以漳州水仙最有名,是、一类观赏价值非常高的经济植物。三倍体的中国水仙,难以自然育种或是通过人工杂交产生新的品种。品种单一、繁殖速度有限、病毒积累导致品质下降和品种退化等问题已大大阻碍了中国水仙的发展。因此,开展开中国水仙新品种培育和品种改良的工作意义重大。随着分子生物学的崛起和植物基因工程等技术的发展,为中国水仙新品种的培育提供了新的方法。本研究以漳州水仙为材料,克隆出开花时间调节基因AP1、FT,并构建了植物表达载体pCAMBIA1301-NtFT、 pCAMBIA1301-NtAP1、pC2300-35S-NtFT-OCS 和 pC2300-35S-NtAP1-OCS,以农杆菌为介导转化烟草和漳州水仙,获得了31株的转基因烟草和3株抗性水仙幼苗。同时克隆出花色形成类黄酮代谢途径中关键基因FLS和ANS,构建了植物表达载体pC2300-35S-NtANS-OCS、pBI121-FLS RNAi,并分别注射到水仙花瓣和副冠中进行瞬时表达,观察到水仙花瓣和副冠颜色均发生了变化。研究结果将为开发中国水仙早花新品种和改良花色提供技术基础和理论参考。主要研究内容及结果如下：1、提取漳州水仙花蕾和叶片的RNA,逆转录成cDNA,并以此为模板,根据已发表的水仙的FT、AP1、FLS, ANS基因的全长序列设计特异性引物,利用常规PCR技术分别克隆出中国水仙中控制开花时间的关键基因FT、API和类黄酮途径中关键基因FLS、ANS。分别构建了植物表达载体pCAMBIA1301-NtFT、 pCAMBIA1301-NtAP1、pC2300-35S-NtANS-OCS、pC2300-35S-NtFT-OCS、 pC2300-35S-NtAP1-OCS 和 pBI121-FLSRNAi.农杆菌介导构建好的pC2300-35S-NtFT-OCS 和 pC2300-35S-NtAP1-OCS载体转化到烟草中,pCAMBIA1301-NtFT 和 pCAMBIA1301-NtAPl载体转化到漳州水仙中。2、以农杆菌介导的NtAPl和NtFT载体转化烟草,获得了转基因烟草植株,用PCR 和 Real-time quantitative PCR进行了检测,证明所获得植株为转基因植株。发现转基因烟草植株的花期均比非转基因的要提前10天左右,在表型上发现转基因植株均比非转基因植株瘦弱矮小。3.以农杆菌介导pCAMBIA1301-NtFT和pCAMBIA1301-NtAP1载体转化了漳州水仙,初步获得了3株抗性幼苗。4.首先用GUS基因建立漳州水仙花瓣和副冠中农杆菌介导瞬时表达技术体系,结果表明此方法可以应用在水仙花瓣和副冠中。将构建好的pC2300-35S-NtANS-OCS、pB1121-NtFLSRNAi 和 pSAK277-MdMYB10(本实验室保存)载体以农杆菌介导导入漳州水仙的花瓣和副冠中进行瞬时表达,初步观察到水仙花瓣和副冠中颜色发生了改变。