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目的:探讨力学因素-流体切应力(fluid shear stress,FSS)和化学因素-血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对人内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)中PIM激酶家族表达的影响及可能的信号机制。方法:(1)人脐血EPCs的分离、培养与鉴定:采用密度梯度离心联合差速贴壁法分离、培养人脐血EPCs;吞噬乙酰化低密度脂蛋白(Dil-acetylated LDL,DilacLDL)与结合FITC标记的荆豆凝集素I(FITC-labeled europaeus agglutinin-I,FITCUEA-I)能力的实验进行细胞学鉴定。(2)VEGF对PIM激酶家族表达的检测:采用实时定量PCR技术检测VEGF刺激0.5 h、1 h、2 h、4 h及6 h时PIM激酶的表达水平。(3)切应力对PIM激酶家族表达的检测:利用平行平板流动腔系统对EPCs加载低(5 dyne/cm2)、中(15 dyne/cm2)及高(30 dyne/cm2)不同强度切应力,作用不同时间后(1 h、2 h、4 h及6 h),用实时定量PCR技术分别检测PIM激酶家族的表达水平。(4)分别用Wortmannin(PI3K特异性抑制剂)、SB202190(p38 MAPK特异性抑制剂)及PD98059(ERK1/2 MAPK特异性抑制剂)作用后,平行观察VEGF及切应力对EPCs中PIM激酶的表达变化。(5)低切应力下相关信号通路的检测:运用Western Blot技术,检测不同时间点信号分子p-ERK1/2的表达变化。结果:(1)人脐血EPCs的形态及鉴定:内皮祖细胞容易形成克隆集落,中间细胞呈圆形,边缘呈梭形,而单个细胞多呈梭形。吞噬Dil-acLDL和结合FITCUEA-I后细胞分别在胞质中呈现红色与绿色。(2)VEGF作用下可以明显上调Pim-1的表达,但是对Pim-2与Pim-3没有影响。(3)切应力作用下,Pim-1、Pim-2及Pim-3表达均上调,但Pim-1与Pim-2在低切应力作用下上调更明显,而Pim-3在中切应力作用下上调更明显。(4)加入ERK1/2特异性抑制剂PD98059后,可以明显抑制VEGF对Pim-1的上调作用;同样也明显抑制切应力诱导的Pim-1、Pim-2及Pim-3表达的上调。(5)短时相低切应力作用下,p38、ERK1/2、Akt与STAT3磷酸化均有变化;且ERK1/2的磷酸化呈现先升高后逐渐降低的趋势。结论:VEGF与可以明显上调Pim-1的表达,切应力可以明显上调Pim-1、Pim-2及Pim-3的表达,ERK1/2信号分子可能参与该上调作用。