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于2002年秋冬季在吉林省不同地区捕获褐家鼠和(鼠平)类鼠,用间接免疫荧光检测鼠肺中的病毒抗原。从抗原阳性鼠肺组织中提取RNA,用RT-PCR扩增部分M和S基因片段的核苷酸序列。纯化回收后测序,与已知的标准核苷酸序列进行同源性和系统进化分析,结果如下:
用G1区SEO特异性引物从41份阳性鼠肺中扩增出37份目的片段,而用HTN型引物未能扩增出目的片段。扩增出的37份部分G1基因片段的核苷酸序列与已知的SEOV的同源性为84.9%~98.8%,但与包括HTNV在内其他型病毒的同源性均低于75%。因此,在吉林主要疫区褐家鼠携带的病毒为SEOV。将扩增的G2区核苷酸序列与已知的SEOV比较,发现与包括辽宁葫芦岛HLD65株在内的S3亚型病毒的同源性最高,为97.2%~99.5%;比较部分S基因片段的核苷酸序列,发现同样与S3亚型病毒的同源性最高,为94.6%~99.3%。在用部分G2与S片段核苷酸序列构建的系统发生树中,吉林褐家鼠中的SEOV与HLD65株、Pf26株等S3亚型病毒株在同一分支。
应用汉坦病毒属特异性引物和PUUV分型引物从245份棕背(鼠平)、红背(鼠平)鼠肺组织中检测出15份阳性标本,应用抗PUUV单克隆抗体对15份逆转录—聚合酶链式反应阳性标本进行间接免疫荧光,其中2份标本的免疫荧光较强。
从247号阳性鼠肺中扩增出S基因编码区核苷酸序列并测序后。同源性比较和进化分析发现,Fusong-Cr-247株病毒与PUUV同源性最高,核苷酸序列同源性为81.8%~83.9%,氨基酸序列同源性为91.6%~97%。在用S片段基因编码区核苷酸序列构建的系统发生树中,Fusong-Cr-247株为一独立分支,且靠近根部。扩增出M基因部分核苷酸序列系统发生树分析结果与S基因分析相符。比较推导的Fusong-Cr-247株S片段的氨基酸序列,发现Fusong-Cr-247株与欧洲、日本及韩国的PUUV一样,有独特的氨基酸特征标记。
研究表明吉林省褐家鼠中携带的病毒为SEOV的S3亚型,是居民区褐家鼠携带的优势流行亚型。吉林抚松地区棕背(鼠平)携带的汉坦病毒属于PUUV,而且不同于已发现的PUUV,为一新亚型。