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第一章该文中涉及的部分质粒载体的构建为了在各种宿主细胞(大肠杆菌和多种哺乳动物细胞)中表达本文所研究的各种蛋白,对多种质粒载体进行了改造:第二章B淋巴细胞刺激因子C端肽的研究及抗血清制备用套式PCR从人胎脑cDNA文库中克隆了B淋巴细胞刺激因子C端肽的cDNA.在大肠杆菌BL21 CodonPlus(DE3)RIL中以包涵体形式表达了BLyS-C.对包涵体的复性条件进行了摸索,建立了BLyS-C的透析复性与纯化方法.第三章BLyS-C突变体(mBLyS-C)的研究该章对野生型BLyS-C进行了突变,构建了mBLyS-C表达质粒,在大肠杆菌中成功表达了mBLyS-C,并对复性和纯化的mBLyS-C进行了功能研究,发现复性的mBLyS-C并未抑制野生型BLyS-C的活性,且仍具有一定的促进体液免疫应答的活性.第四章BCMA-Fc1在大肠杆菌中的表达、复性、纯化与应用为大量制备BCMA-Fc1融合蛋白,构建了人BCMA胞外区与人IgG1 Fc(Fc1)的融合基因,在大肠杆菌中分别以可溶形式和包涵体形式表达并纯化了BCMA-Fc1融合蛋白.建立了ELISA测定BCMA-Fc1与BLyS亲和常数的方法.BCMA-Fc1可结合BLyS-C的受体结合位点,亲和常数为1.03×108 L/mol.BCMA-Fc1有望用于BLyS及其受体相关药物的筛选、验证,检测BlyS浓度,监测重组BlyS-C的质量等.第五章TACI/BCMA与人IgG1/IgG4 Fc融合蛋白在哺乳动物细胞中的表达、纯化和鉴定从人肝脏和肾脏cDNA文库中扩增了BLyS的受体TACI及BCMA的胞外编码区,分别以pSec1、pcDNA3和pTSFc4为表达载体,构建了TACI/BCMA-Fc1/Fc4的哺乳动物细胞分泌表达质粒pSec1-Fc1-TACI、pSec1-Fc1-BCMA、pcDNA3-Fc1-TACI、pcDNA3-Fc1-BCMA、pTSFc4-TACI和pTSFc4-BCMA.以pcDNA3-Fc1-TACI和pcDNA3-Fc1-BCMA为表达载体,使用电穿孔法转染COS-7细胞,从1升无血清培养上清中可纯化得到分泌表达的TACI-Fc1约2mg,BCMA-Fc1约1mg.