论文部分内容阅读
目的:探讨慢性乙型肝炎(CHB)中医临床常见的证候特征，并从整体论出发，借助转录组学技术和信息分析技术探讨CHB常见证候（湿热蕴结证、肝郁脾虚证）潜在生物标志物，同时分析潜在标志物与功能的联系。 方法:规范采集明确诊断的CHB患者临床四诊信息，运用频数统计CHB患者中医证型分布情况，选取证型无明显兼夹者为研究对象，经X2检验筛选各证候差异症状，纳入二元Logistic回归分析提取特征性症状，并以刀切法验证。运用系统生物学转录组学技术对上述病例中高典型度的湿热蕴结证、肝郁脾虚证的典型证候样本（集合一）进行检测，同时设立CHB隐证型者作为相同疾病状态下无证候对照，以健康志愿者为健康对照，每组17例，共68例。在集合一中初步筛选证候特征性基因表达谱，结合已有的人体通路数据库和相关知识背景，分析对证候有突出贡献的通路及生物功能。上步筛选获得的差异基因表达谱与集合二（前期已完成检测）进行比对，选取两个集合中均稳定表达的差异基因探针作为基础。应用非参数秩和检验与二元Logistic回归分析在集合一CHB典型证候组（湿热蕴结证、肝郁脾虚证、隐证型组）中构建证候判别模型，采用ROC曲线分别评价其在集合一与集合二中的诊断效率，确立典型证候的潜在生物标志物谱并初步阐述其相关生物学功能。 结果:①1474例CHB患者中，以湿热蕴结证(46.3％)和肝郁脾虚证(30.8％)为主，常见证还包括肝肾阴虚证(10.7％)，符合慢性乙型肝炎中医证型临床分布特征。②以主证型明确者862例CHB患者为主要研究对象，经二元Logistic回归分析湿热蕴结证的症状为身目发黄、口臭、大便秽臭、口干渴、苔色黄、苔质厚、腻;肝郁脾虚证为便溏、脘闷、倦怠乏力、舌质淡、边有齿痕、苔色白、脉濡、缓;肝肾阴虚证为腰酸、心悸、目干、多梦、舌质红、脉细，其刀切法预测准确率均高于85.8％。③集合一（68例）基因芯片结果表明，CHB湿热蕴结证与肝郁脾虚证相比，共有637个基因发生显著改变，（上调差异基因558个，下调差异基因79个）;与隐证型组组相比，共有298个基因发生显著改变（上调186个，下调112个）。CHB肝郁脾虚与隐证型组组相比，共有254个基因发生显著改变（上调38个，下调216个）。表明CHB湿热蕴结证与肝郁脾虚证典型证候各自有其特定的差异基因表达谱。④CHB湿热蕴结证有51个稳定表达差异基因探针，其诊断模型Y湿热蕴结证自身验证率为96.08％，ROC分析集合一和集合二中的AUC均大于0.900且具有统计学差异(P＜0.05)，在最佳分界值下灵敏度和特异度均大于86.00％，阳性预测值均高于69.00％，阴性预测值均高于95.00％，表明模型相关16个基因探针为“CHB湿热蕴结证潜在生物标志物谱”。CHB肝郁脾虚证从25个稳定表达的差异基因探针中建立的诊断模型Y肝郁脾虚证的自身验证率为82.35％，ROC分析集合一和集合二中的AUC均大于0.840且具有统计学差异(P＜0.05)，在最佳分界值下灵敏度均大于87.00％，特异度均大于60.00％，阳性预测值高于44.00％，阴性预测值高于91.00％，表明模型相关14个基因探针为“CHB肝郁脾虚证潜在生物标志物谱”。⑤慢性乙型肝炎湿热蕴结证与非湿热蕴结证相比差异基因相关的细胞周期及适应性免疫应答增强，细胞因子相关信号通路的激活以及集合一、集合二中稳定表达的差异基因ZNF91、PIM1、SELENBP1、EPB42所具有的功能均提示湿热蕴结证免疫反应活跃同时机体炎症增强。慢性乙型肝炎肝郁脾虚证与非肝郁脾虚证相比差异基因相关的细胞周期减弱，能量代谢下降及集合一、集合二中稳定表达的差异基因SEPT1、SEPT2、KIF22所具有的功能均提示肝郁脾虚证细胞增殖减缓并对神经系统产生影响。 结论:①湿热蕴结证、肝郁脾虚证和肝肾阴虚证是慢乙肝的临床常见证型。慢乙肝湿热蕴结证特征为身目发黄、口臭、大便秽臭、口干渴、苔色黄、苔质厚、腻;肝郁脾虚证为便溏、脘闷、倦怠乏力、舌质淡、边有齿痕、苔色白、脉濡、缓;肝肾阴虚证为腰酸、心悸、目干、多梦、舌质红、脉细。可为规范化的证候诊断和指南的修改提供重要参考依据。②慢乙肝湿热蕴结证潜在生物标志物谱有16个基因探针，生物信息分析结果提示该证与免疫反应活跃使细胞因子增多激活细胞凋亡等通路导致机体炎症增强相关。③慢乙肝肝郁脾虚证潜在生物标志物谱有14个探针，生物信息分析结果提示该证与细胞增殖减缓导致免疫反应的进一步减弱同时影响神经细胞发生抑郁相关。