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背景:
急性肺损伤（Acutelunginjury,ALI）或急性呼吸窘迫综合征（Acuterespiratorydistresssyndrome,ARDS）是指由各种肺内外致病因素所导致的急性肺泡上皮细胞和肺血管内皮细胞的损伤，以急性呼吸衰竭为主要特征的一种临床综合征。ALI/ARDS的发病机制复杂，最常见的病因是由细菌内毒素（脂多糖，Lipopolysaccharide,LPS）诱发的脓毒症。ALI/ARDS发生发展的关键机制是失控的炎症反应破坏了肺泡-血管内皮屏障，导致大量的肺血管内皮细胞激活和损伤，因此修复损伤的肺泡-血管内皮屏障对于治疗ALI/ARDS来说具有重要的意义。而研究表明，内皮祖细胞（Endothelialprogenitorcells,EPCs）能够修复损伤的肺血管内皮细胞并促进血管的新生，有助于维护肺泡-血管内皮屏障的完整性，然而其具体机制尚未完全阐明。因此研究EPCs在脓毒症中的损伤修复机制，对于治疗由脓毒症诱发的ALI/ARDS来说具有重要的意义。
本课题组前期研究发现LPS能抑制晚期内皮祖细胞（lateEPCs）的增殖、迁移、粘附和体外血管生成等功能，然而其具体机制仍尚未清楚。有研究表明LPS可通过Toll样受体4（Toll-likereceptor4,TLR4）信号通路发挥炎症损伤作用。然而lateEPCs上是否表达TLR4受体，该受体是否在LPS损伤lateEPCs中发挥作用尚不得而知。此外还有研究发现LPS诱导的内皮细胞功能障碍与长寿蛋白1（Sirtuin1,SIRT1）的表达下调相关。然而LPS是否会改变lateEPCs中SIRT1的表达，仍不明确。
目的:
1.研究晚期内皮祖细胞是否表达TLR4受体；
2.研究TLR4受体信号通路是否参与脂多糖（LPS）对晚期内皮祖细胞功能活性的抑制；
3.研究脂多糖（LPS）对晚期内皮祖细胞中SIRT1表达的影响。
方法:
1.采用Ficoll密度梯度离心法从脐带血中分离和培养出晚期内皮祖细胞，并进行细胞鉴定。
2.采用细胞免疫荧光、WesternBlot和RT-PCR检测晚期内皮祖细胞中TLR4受体的表达情况。
3.应用TLR4受体抑制剂（CLI-095）干预后，研究LPS刺激下晚期内皮祖细胞的功能改变（包括增殖、迁移、粘附和体外血管生成）和细胞内SIRT1的表达变化。
结果:
1.细胞免疫荧光、WesternBlot和RT-PCR均检测到晚期内皮祖细胞中TLR4受体的表达。
2.2μg/ml的TLR4抑制剂（CLI-095）单独处理并不影响细胞的功能活性，与Control组相比无统计学差异；10μg/ml的LPS能明显抑制晚期内皮祖细胞的功能活性（增殖、迁移、粘附和体外血管生成），而通过CLI-095预处理30min能明显减弱LPS的抑制作用。
3.10μg/ml的LPS能明显下调晚期内皮祖细胞中SIRT1的表达，2μg/ml的TLR4抑制剂（CLI-095）单独处理与Control组相比无统计学差异，而用CLI-095预处理30min，能明显减弱LPS引起的SIRT1的表达下调。
结论:
1.晚期内皮祖细胞表达TLR4受体；
2.脂多糖（LPS）通过激活TLR4抑制晚期内皮祖细胞的功能活性；
3.脂多糖（LPS）可通过激活TLR4下调晚期内皮祖细胞中SIRT1的表达。
急性肺损伤（Acutelunginjury,ALI）或急性呼吸窘迫综合征（Acuterespiratorydistresssyndrome,ARDS）是指由各种肺内外致病因素所导致的急性肺泡上皮细胞和肺血管内皮细胞的损伤，以急性呼吸衰竭为主要特征的一种临床综合征。ALI/ARDS的发病机制复杂，最常见的病因是由细菌内毒素（脂多糖，Lipopolysaccharide,LPS）诱发的脓毒症。ALI/ARDS发生发展的关键机制是失控的炎症反应破坏了肺泡-血管内皮屏障，导致大量的肺血管内皮细胞激活和损伤，因此修复损伤的肺泡-血管内皮屏障对于治疗ALI/ARDS来说具有重要的意义。而研究表明，内皮祖细胞（Endothelialprogenitorcells,EPCs）能够修复损伤的肺血管内皮细胞并促进血管的新生，有助于维护肺泡-血管内皮屏障的完整性，然而其具体机制尚未完全阐明。因此研究EPCs在脓毒症中的损伤修复机制，对于治疗由脓毒症诱发的ALI/ARDS来说具有重要的意义。
本课题组前期研究发现LPS能抑制晚期内皮祖细胞（lateEPCs）的增殖、迁移、粘附和体外血管生成等功能，然而其具体机制仍尚未清楚。有研究表明LPS可通过Toll样受体4（Toll-likereceptor4,TLR4）信号通路发挥炎症损伤作用。然而lateEPCs上是否表达TLR4受体，该受体是否在LPS损伤lateEPCs中发挥作用尚不得而知。此外还有研究发现LPS诱导的内皮细胞功能障碍与长寿蛋白1（Sirtuin1,SIRT1）的表达下调相关。然而LPS是否会改变lateEPCs中SIRT1的表达，仍不明确。
目的:
1.研究晚期内皮祖细胞是否表达TLR4受体；
2.研究TLR4受体信号通路是否参与脂多糖（LPS）对晚期内皮祖细胞功能活性的抑制；
3.研究脂多糖（LPS）对晚期内皮祖细胞中SIRT1表达的影响。
方法:
1.采用Ficoll密度梯度离心法从脐带血中分离和培养出晚期内皮祖细胞，并进行细胞鉴定。
2.采用细胞免疫荧光、WesternBlot和RT-PCR检测晚期内皮祖细胞中TLR4受体的表达情况。
3.应用TLR4受体抑制剂（CLI-095）干预后，研究LPS刺激下晚期内皮祖细胞的功能改变（包括增殖、迁移、粘附和体外血管生成）和细胞内SIRT1的表达变化。
结果:
1.细胞免疫荧光、WesternBlot和RT-PCR均检测到晚期内皮祖细胞中TLR4受体的表达。
2.2μg/ml的TLR4抑制剂（CLI-095）单独处理并不影响细胞的功能活性，与Control组相比无统计学差异；10μg/ml的LPS能明显抑制晚期内皮祖细胞的功能活性（增殖、迁移、粘附和体外血管生成），而通过CLI-095预处理30min能明显减弱LPS的抑制作用。
3.10μg/ml的LPS能明显下调晚期内皮祖细胞中SIRT1的表达，2μg/ml的TLR4抑制剂（CLI-095）单独处理与Control组相比无统计学差异，而用CLI-095预处理30min，能明显减弱LPS引起的SIRT1的表达下调。
结论:
1.晚期内皮祖细胞表达TLR4受体；
2.脂多糖（LPS）通过激活TLR4抑制晚期内皮祖细胞的功能活性；
3.脂多糖（LPS）可通过激活TLR4下调晚期内皮祖细胞中SIRT1的表达。