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研究目的芳香烃受体(AhR)是一种配体激活的转录因子,大量的研究证实芳香烃受体通过调控下游靶基因的转录,参与调节多种生物学过程,包括细胞周期调控、免疫稳态维持、氧化应激反应、胎盘血管的发育和重塑、生殖等。芳香烃受体在人体多种组织广泛表达,在胎盘的表达水平尤高,且主要分布于胎盘合体滋养层细胞和胎盘血管内皮细胞,而胎盘组织的重要的生物转化酶CYP1A1、CYP1B1皆为其下游靶基因。本实验收集了孕早期流产的胎盘组织,孕晚期的正常胎盘组织和轻度子痫前期胎盘组织,通过免疫组织化学,western bloting,RT-PCR和Real-time PCR技术检测芳香烃受体及其下游的靶基因CYP1A1和CYP1B1在胎盘组织的分布及其表达水平,进一步利用芳香烃受体的内源性配体ITE及人滋养层细胞系JEG-3和JAR细胞研究芳香烃受体对滋养层细胞的增殖、迁移的影响。材料与方法1、取正常(不合并其它疾病,未发现胎儿染色体异常)妊娠6-8周,行人工流产术的病人胚胎的绒毛组织,正常足月妊娠和轻度子痫前期病人足月妊娠(孕37周-40周),行择期剖宫产的胎盘组织(除去蜕膜和胎膜),即我们的研究对象。2、通过免疫组织化学染色的方法,了解芳香烃受体在孕早期胎盘组织,正常孕晚期胎盘组织和子痫前期胎盘组织中的分布情况。3、通过Western blotting方法测定芳香烃受体蛋白在三种组织的表达情况。4、通过RT-PCR和Real-time PCR测定芳香烃受体mRNA,及其下游靶基因CYP1A1和CYP1B1mRNA在早期和晚期胎盘组织中的表达水平。5、RT-PCR技术检测ITE处理前后人滋养层细胞系JEG-3和JAR细胞中CYP1A1mRNA水平,确定ITE对芳香烃受体的激活作用,6、利用结晶紫染色法检测ITE处理前后两种细胞的增殖情况,并通过流式细胞术检测细胞周期的变化。7、通过Transwell的实验方法检测ITE处理前后JEG-3和JAR细胞的迁移情况。实验结果1、免疫组织化学染色发现,芳香烃受体在不同孕期的胎盘组织中均有表达,且主要分布于合体滋养层细胞,早期胎盘组织中细胞滋养层细胞无芳香烃受体表达；早期胎盘组织中小血管内皮细胞有芳香烃受体表达,而晚期胎盘组织中只有少数大血管内皮细胞有芳香烃受体的表达；芳香烃受体在子痫前期胎盘组织中的分布与正常胎盘组织无明显差别。2、Western bloting检测发现,晚期胎盘组织中的芳香烃受体蛋白水平高于早期胎盘组织,轻度子痫前期胎盘组织中的芳香烃受体蛋白水平远高于正常胎盘组织。3、RT-PCR和Real-time PCR检测发现晚期胎盘组织中的AhR、CYP1A1、CYP1B1 mRNA水平均高于早期胎盘组织。4、芳香烃受体在JEG-3和JAR细胞中的表达水平不同,JEG-3中表达量较高,而JAR细胞中几乎不表达；在JEG-3细胞中,ITE通过激活芳香烃受体促进CYP1A1mRNA的表达。5、ITE抑制JEG-3细胞的增殖,对JAR细胞无明显影响；ITE促使JEG-3细胞停滞于细胞周期的S期,而对JAR细胞的细胞周期无明显影响。6、ITE对JEG-3和JAR细胞的细胞迁移无显著影响。结论：1、芳香烃受体在胎盘的生长发育过程中发挥重要作用,其在生长不同阶段表达的差异很可能与维持胎盘滋养层细胞的分化及激素合成,从而维持正常妊娠密切相关。2、芳香烃受体可能通过影响滋养层细胞的迁移参与子痫前期的发生；芳香烃受体在轻度子痫前期胎盘组织中的高水平表达,可能作为预测和判断轻、重度子痫前期的潜在观测指标。3、芳香烃受体在胎盘滋养层细胞增殖中发挥着重要作用,其内源性配体ITE可以通过细胞周期S期的阻滞来抑制细胞的增殖。