活血软坚方促血管新生作用及其机制研究

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目的:  冠心病(CHD)是以血管新生不足为重要病理改变的疾病,为寻求中西医结合达到更好的治疗效果,本课题以中医理论为指导,应用内皮细胞标记绿色荧光的转基因斑马鱼模型,通过观察活血软坚方对转基因斑马鱼模型血管新生的调节作用,并研究其对转基因斑马鱼模型相关血管新生基因表达的影响和对HUVEC内皮细胞的干预作用,探讨其对血管新生的疗效和可能的作用机制,为今后活血软坚方的临床应用提供基础研究的支持。  方法:  1.建立VRI诱导的转基因斑马鱼节间血管损伤模型,按CTRL组、模型组和活血软坚方不同剂量组进行分组和干预。在荧光倒置显微镜下观察活血软坚方在不同浓度下对节间血管的保护作用和对斑马鱼肠下静脉的干预作用。  2.观察活血软坚方对转基因斑马鱼血管新生的作用,Real time PCR检测不同浓度药物组干预下转基因斑马鱼体内flt-1,kdr,kdrl的mRNA表达。  3.MTT法检测活血软坚方对HUVEC内皮细胞的毒性作用和促增殖作用,Westernblot检测在同一浓度下,6H、12H和24H三个时间段各组细胞Akt,P38,P-P38,P44/42,P-P44/42以及VEGFR-1的蛋白表达情况。  结果:  1.活血软坚方对转基因斑马鱼肠下静脉有显著的促血管新生作用(P<0.001),对VRI诱导的转基因斑马鱼节间血管损伤有保护作用(P<0.001)。  2.和CTRL组相比,VRI抑制了转基因斑马鱼体内flt-1,kdr,kdrl的mRNA的表达(P<0.05);而与VRI组相比,活血软坚方可明显促进转基因斑马鱼体内flt-1,kdr,kdrl的mRNA的表达(P<0.05)。  3.与CTRL组比较,活血软坚方对HUVEC内皮细胞有明显的促增殖作用,且能增加细胞内Akt,P38,P-P38,P44/42,P-P44/42以及VEGFR-1的蛋白表达量。  结论:  1.根据“活血化瘀”和“软坚散结”的中医理论,并结合唐靖一教授在临床上善用活血软坚药物治疗胸痹心痛的经验心得,活血软坚方能够有效干预冠心病。  2.活血软坚方可促进转基因斑马鱼节间血管损伤的恢复,其机制可能与上调转基因斑马鱼体内flt-1,kdr,kdrl的mRNA的表达有关。  3.活血软坚方有促转基因斑马鱼肠下静脉血管出芽和交叉的效用,并能促进HUVEC内皮细胞的增殖,其机制可能与上调细胞内Akt,P38,P-P38,P44/42,P-P44/42以及VEGFR-1的表达有关。  4.本课题证明了活血软坚方具有在体内和体外的促血管新生作用及其可能是通过上调VEGFR表达的作用机制。
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