【摘 要】
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Toll-样受体(Toll like receptors,TLRs)可以通过识别病原微生物启动天然免疫并激活适应性免疫。本研究以中国荷斯坦奶牛和新疆褐牛为研究对象,对TLR4基因外显子3进行了序列
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Toll-样受体(Toll like receptors,TLRs)可以通过识别病原微生物启动天然免疫并激活适应性免疫。本研究以中国荷斯坦奶牛和新疆褐牛为研究对象,对TLR4基因外显子3进行了序列分析,并对发现的多态性位点进行PCR-RFLP分析,共发现TLR4 E3+1656、TLR4E3+2021和TLR4 E3+2414三个多态位点,其中TLR4 E3+1656位点发生T/C的碱基突变,但没有引起氨基酸变化;TLR4 E3+2021位点C/T的碱基突变,导致编码氨基酸由苏氨酸变为异亮氨酸;TLR4 E+2414位点发生G/A突变,引起氨基酸由精氨酸变为谷氨酸。但由于TLR4 E+2414位点只发现2个AB基因型个体,其余均为BB基因型个体,不具有统计意义,因此只对TLR4 E3+1656和TLR4E3+2021位点χ2检验表明:两个品种这两个位点的突变均处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。运用最小二乘法分析表明:TLR4 E3+1656位点的各基因型个体间的平均SCS差异不显著(P>0.05);而TLR4 E3+2021位点中AA与AB基因型SCS水平差异显著(P<0.05),AA与BB基因型SCS水平差异极显著(P<0.01),但AB与BB基因型SCS水平差异不显著(P>0.05),说明TLR4 E3+2021位点的AA基因型可能与抗乳房炎的抗性有关,A等位基因是乳房炎抗性的有利基因。为进一步研究TLR4 E3+2021位点不同基因型对奶牛SCS的影响,采用Quantitative Real-Time PCR技术检测了新疆褐牛不同基因型个体中TLRs信号通路下游的部分基因mRNA的表达水平,结果显示:NF-κB1、NF-κB2和IL-1β基因mRNA表达水平与TLR4 E3+2021位点AB和BB两种基因型差异显著(P<0.05),TNF、TLR4、IL-10、IL-8、MD-2和Myd88基因mRNA表达水平与TLR4 E3+2021位点AB和BB两种基因型差异不显著(P>0.05)。这些结果提示我们TLR4 E3+2021位点碱基的改变可能引起了核内转录因子NF-κB表达量的变化,从而进一步导致IL-1β的mRNA表达量改变。
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