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中药一直是寻找和发现高效低毒的降糖新药或先导化合物的庞大宝库。然而，中药成分复杂，基于传统的“提取物活性测定-系统分离-单体化合物活性测定”模式不但费时费力而且盲目性大，微量活性成分在分离过程中又极易丢失。因此建立快速、简便、高通量的药物筛选手段，一直是中药、天然药物研究的重点内容。 薄层色谱-生物自显影技术是一种将薄层色谱分离与活性检定相结合的一种技术，兼具薄层色谱法和生物检定法的优点，如与现代分离分析技术结合，能够实现对中药等复杂体系中活性化合物的快速发现、分离与鉴定。 本论文选择与血糖代谢密切相关的三种酶——二肽基肽酶四(DPPⅣ)、α-糖苷酶和α-淀粉酶为研究对象，分别建立了相应的薄层色谱-生物自显影方法。构建了“薄层色谱-生物自显影-导向分离”降糖成分的快速筛选体系，采用该体系对50余味中药的DPPⅣ酶、α-糖苷酶和20余味中药的α-淀粉酶抑制成分进行了筛选和目标成分的导向分离。采用传统比色法或薄层色谱-生物自显影法对获得的成分进行了活性评价。 首先，以甘氨酰脯氨酸对硝基苯胺(Gly-Pro-pNA)为底物，首次建立了筛选天然DPPⅣ抑制剂的薄层色谱-生物自显影方法，采用该方法在对50余味中药的筛选过程中，发现骆驼莲子和川贝母中含有潜在的DPPⅣ抑制成分。采用制备薄层色谱法分离获得活性化合物去氢骆驼蓬碱;将薄层色谱-生物自显影技术和LC-MS引导的自动纯化技术联用，从川贝母中快速分离得到活性化合物贝母辛，其IC50值为61.3μM，与阳性药抑二肽素A(DiprotinA)活性相当(IC50=58.1μM)。 其次，以β-萘基-α-葡萄糖苷为底物，对已有的薄层色谱-生物自显影方法做了改进，大大提高了方法的灵敏度和重现性。采用该方法对50余味中药进行了筛选，发现中药连翘提取物中含有较多活性斑点，采用薄层色谱-生物自显影引导的柱色谱分离方法从连翘中分离得到12个化合物，鉴定了9个，其中7个化合物具有α-糖苷酶抑制作用。 再次，以直链淀粉为底物，首次建立了筛选天然α-淀粉酶抑制剂的薄层色谱-生物自显影方法。采用该方法从20余中药提取物中筛选潜在的α-淀粉酶抑制剂，发现中药紫苏子提取物中含有活性斑点，采用薄层色谱-生物自显影引导的柱色谱分离方法从紫苏子中分离并鉴定得到5个化合物，其中异迷迭香酸苷的IC50值为1.28 mM。阳性药阿卡波糖的IC50值为0.082 mM。 综上所述，本论文以薄层色谱-生物自显影为核心技术，联合现代分离分析技术如制备薄层色谱、柱色谱，以及质谱引导的自动纯化系统等技术，从目标药物中筛选分离得到一系列降糖活性成分。实验研究结果表明所构建的“薄层色谱-生物自显影-导向分离”天然降糖成分筛选体系和天然DPPⅣ抑制剂快速发现的“薄层色谱-生物自显影-质谱引导的自动纯化”平台为天然降糖药的快速发现提供了有效的途径。本论文的研究也为其他天然活性成分的快速筛选和发现提供了研究思路和技术支持。