【摘 要】
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该论文对蕲蛇蛇毒进行了SDS-聚丙烯酰胺电泳分析,应用TSK G3000SW凝胶过滤及灌注离子交换色谱对其进行分离,并应用聚丙烯酰胺凝胶电泳对分离组分进行进一步纯化.比较几种不同
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该论文对蕲蛇蛇毒进行了SDS-聚丙烯酰胺电泳分析,应用TSK G3000SW凝胶过滤及灌注离子交换色谱对其进行分离,并应用聚丙烯酰胺凝胶电泳对分离组分进行进一步纯化.比较几种不同分离方法,确定采用POROUS 20 HQ(7.5mm×75mm)色谱柱对蕲蛇蛇毒进行分离.样品经0.02M的硼酸盐缓冲液上样平衡,吸附的成分用0-0.2M/60ml的硫酸钠盐直线梯度洗脱,共得到12个蛋白峰.经ACE活性鉴定后,1＃、2＃、5＃、6＃和10＃有ACE抑制活性,其中5＃活性最强.对5＃进行聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化,得到三条蛋白带P1、P2、P3,经活性鉴定后确定只有P3有ACE抑制活性.该研究首创应用毛细管胶束电泳方法鉴定ACE活性,实验更简便,结果更精确.在对毛细管胶束电泳不同分离条件选择后,确定了最佳分离条件.经鉴定后计算,纯化组分P3的抑制活性IC<,50>=2.123mg/ml(0.106mM),强于以往基于蛇毒中活性肽开发的ACE抑制剂如卡托普利.经SDS-PAGE标定,P3的分子量为26KD左右.
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