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肿瘤是一类常见病、多发病,目前,恶性肿瘤已成为危害人类健康最严重的疾病之一。其死亡率在发达国家居第一位,在发展中国家居第二位,且发病率仍呈上升趋势。世界卫生组织预测,到2020年,将有2000万新发癌症病例,其中死亡人数达1200万,且绝大部分将发生在发展中国家。因此,攻克肿瘤成为近40年来各国政府与科研、医疗机构的主要任务之一,其中,中医中药抗肿瘤作用的研究一直备受关注,已成为肿瘤治疗过程中不可或缺的手段之一。虽然化疗药物杀死杀伤癌细胞的能力较强,近期疗效较好,但由于化疗药的毒副作用明显,甚至杀死正常细胞,因而近年来从天然药物中寻找高效低毒的抗肿瘤药物成为研究热点。因此,中药如何调整癌症晚期患者生理平衡,提高病人的免疫力和生存质量,降低化疗和放疗的毒副作用,降低复发率,提高生存率,以及治疗、控制癌症发展等,是目前恶性肿瘤治疗过程中值得研究的一个重要课题。
据报道,菊科旋覆花属植物欧亚旋覆花是一种传统中草药,中国、韩国和日本等国都有分布,我国主产于河南、河北、江苏、浙江、安徽、山东、内蒙等地,具有抗炎、抗肝炎、抗肝损伤、抗肿瘤等多种生物活性。Park EJ经研究得到的欧亚旋覆花氯仿提取物在HL-60细胞中显示出很高的细胞毒性;吴一兵等从欧亚旋覆花中用不同方法得到石油醚提取物、氯仿提取物、醋酸乙酯提取物和正丁醇提取物,并用8种肿瘤细胞:SK、ASPC、BG、HGC27、PANC、H466、Colon和Eca-109对得到的四部分萃取物进行抗肿瘤试验,发现氯仿和石油醚部分对不同细胞系在72h内有一定的抑制作用。旋覆花素是从中药旋覆花中经氯仿抽提得到的提取物,其中旋覆花内酯可能是旋覆花抗肿瘤的有效化学成分之一,目前已引起国内外专家学者的关注。
本实验拟采用MTT法,检测低、中、高三个剂量范围旋覆花素对小鼠肝癌H22细胞株,小鼠肉瘤S180细胞株、人肺腺癌A549细胞株、人卵巢癌SK-OV3细胞株及人宫颈癌Hela细胞株的细胞毒性作用,并通过比较旋覆花素抑制H22、S180、A549、SK-OV3和Hela细胞生长的量效关系曲线,分析旋覆花素对以上五种肿瘤细胞的毒性特点。
一、旋覆花素体外抗肿瘤作用的实验剂量范围筛选。
目的:寻找旋覆花素对H22、S180、A549、SK-OV3、Hela的细胞毒性的最佳剂量范围。
方法:(1)配制低(0.3125μg/ml、0.625μg/ml、1.25μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml)、中(3.125μg/ml、6.25μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)、高(31.25μg/ml、62.5μg/ml、125μg/ml、250μg/ml、500μg/ml、1000μg/ml)三组剂量范围的旋覆花素溶液,用MTT法检测各剂量范围对以上五种肿瘤细胞生长的抑制作用,测定各剂量范围对以上五种肿瘤细胞的OD值,并计算抑制率,选出最佳剂量范围。
结论:(1)旋覆花素在体外具有抗肿瘤作用且存在一定的选择性。旋覆花素在31.25μg/ml、62.5μg/ml、125μg/ml、250μg/ml、500μg/ml、1000μg/ml的剂量时,对H22、S180、A549及SK-OV3四种肿瘤细胞的生长抑制作用均较明显,而对Hela细胞的抑制作用均较低。(2)旋覆花素对肿瘤细胞的抑制作用与剂量有显著的依赖关系。在31.25μg/ml、62.5μg/ml、125μg/ml剂量时旋覆花素对S180、SK-OV3及Hela细胞的抑制作用最高分别为12.00%、18.15%及14.07%;对H22和A549细胞的抑制作用最高分别为70.09%和56.81%。可见,在31.25μg/ml、62.5μg/ml及125μg/ml剂量时,旋覆花素对S180、SK-OV3及Hela细胞的抑制作用明显低于对H22和A549细胞的抑制作用,但在250μg/ml、500μg/ml及1000μg/ml剂量时,旋覆花素对H22、S180、A549及SK-OV3四种肿瘤细胞的生长抑制作用更明显,最高抑制率均在67.50%以上,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。