野菊花中活性成分提取工艺及其与牛血清白蛋白相互作用研究

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目的:利用闪式提取器提取野菊花中蒙花苷和豚草素A,以期获得最佳提取工艺。运用多种技术手段研究野菊花中黄酮类化合物与牛血清白蛋白(BSA)相互作用,从分子水平上阐明其作用机制。  方法:按照三因素四水平正交试验表,以得膏率、蒙花苷的含量、豚草素 A的含量为指标,利用闪式提取器提取野菊花中蒙花苷和豚草素A,探索最佳工艺结果。运用荧光光谱法、分子对接法、质谱法、平衡透析法研究野菊花中木犀草素、芹菜素、刺槐素、麦黄酮、5,3’,4’-三羟基-6,7-二甲氧基黄酮、5,7,4’-三羟基-6,3’,5’-三甲氧基黄酮、蒙花苷等7个黄酮类化合物与牛血清白蛋白(BSA)相互作用,测定评价其作用机理、结合常数、结合位点、结合距离、作用力类型、结合率等相关结果。  结果:(1)组织破碎法提取野菊花中蒙花苷和豚草素A的最佳提取工艺为65%乙醇、药材质量与溶剂体积比为1:10、提取3次。  (2)荧光猝灭法结果显示7个黄酮类化合物都可与BSA结合得到复合物,非辐射能量转移与静态猝灭共同导致了BSA荧光猝灭;结合位点数均约为1;7种药物氢键和范德华力、疏水作用力、静电作用力3种作用力都存在。同步荧光结果表明药物的增加导致BSA分子中酪氨酸残基和色氨酸残基的荧光均被猝灭,但药物与BSA作用的结合位点更接近于色氨酸;且部分药物与BSA相互作用导致BSA的微环境发生变化,构象略有改变。三维荧光光谱结果与同步相符。计算得到结合率表明在不同条件下,不同化合物结合率均在99.99%-80.00%,均属于高结合率化合物。分子对接结果表明7个黄酮类化合物均可与BSA结合,作用力与热力学分析一致。质谱法验证7个黄酮类化合物可与BSA结合。  (3)在适宜范围内,pH值的小幅度变化对BSA与7种黄酮类化合物结合能力的影响很小。  结论:首次以得膏率、蒙花苷的含量、豚草素A的含量为评价指标进行野菊花提取工艺研究,方法高效、环保、节约成本,探索小试条件下最佳提取工艺。首次运用光谱法、分子对接法、质谱法研究野菊花中7种结构不同的黄酮类化合物与牛血清白蛋白相互作用,初步推断这7种黄酮类化合物与牛血清白蛋白结合能力与化合物的取代基的种类、个数、位置相关,酚羟基个数越多,结合能力也越大;B环上羟基与BSA形成氢键的能力大于A环;甲氧基个数比羟基影响能力小。
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