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病毒性心肌炎(Viral myocarditis,VMC)是一种病毒感染引起的心血管疾病，多种病毒都可引VMC，其中以肠道病毒Coxsackievirus B3(CVB3)感染最常见，严重危害人类健康。目前研究认为，CVB3诱导的心肌炎发病机理包括病毒对心肌的直接损伤和过强免疫应答导致的间接损伤，但其具体的发病机制并未完全阐明。IL-35是新发现的由Treg细胞特异性产生的IL-12细胞因子家族新成员，结构上是由p35和EBI3亚基组成的异源二聚体，是Treg细胞发挥最大抑制效应所必须的一种细胞因子。它可以扩增Treg细胞，诱导iTR35细胞产生和促进Th1细胞分化，以及抑制效应T细胞产生和Th17细胞分化，在自身免疫病、病毒感染和真菌感染等疾病中发挥重要作用。为了探讨IL-35在CVB3感染的病毒性心肌炎发病中的作用及其机制，我们建立了CVB3诱导的BALB/c小鼠病毒性心肌炎模型，通过病理切片及其评分显示心肌炎炎症程度在感染后第0、3、5、7天的动态变化情况，同时运用ELISA方法检测了病毒性心肌炎小鼠心脏中IL-35在CVB3感染后第0、1、3、5、7、9天动态表达情况，并对第七天小鼠心肌组织病理评分、体重改变与心肌组织中IL-35表达分别做了相关性分析。在此基础上，我们通过PEI包裹IL-35真核表达质粒，腹腔注射老鼠的方法过表达模型小鼠心肌组织中IL-35，并运用FACS、ELISA、Real-time PCR等实验技术检测相关指标，研究IL-35在VMC中发病的作用及其机制。首先我们通过建立雄性BALB/c小鼠病毒性心肌炎模型，研究病毒性心肌炎中IL-35的表达与心肌炎发病严重程度的相关性。我们记录了CVB3感染后小鼠体重变化情况，通过病理切片观察CVB3感染后第0、3、5、7天心肌炎炎症严重程度变化，运用ELISA的方法检测感染后第0、1、3、5、7、9天心脏中IL-35表达水平，并对感染后第七天两者做了相关性分析。结果发现:雄性BALB/c小鼠在CVB3感染后第3天左右体重明显下降并持续减轻，同时心肌组织出现明显病变并逐渐加剧，而IL-35的表达在感染后第1、3天逐渐升高，第5、7、9天逐渐下降。并且第七天心肌组织中IL-35的表达与小鼠体重下降和心肌评分呈负相关。随后，我们研究IL-35在病毒性心肌炎中的作用及其可能的机制，通过腹腔注射PEI包裹的IL-35质粒在心肌组织中过表达IL-35，随后观察小鼠感染CVB3后一系列体征变化，包括生存率、体重变化曲线、心体比、CK、CK-MB以及心肌病理评分，我们发现过表达IL-35对CVB3诱导的病毒性心肌炎具有保护作用，与未处理组和载体FC组相比得到显著改善,且心肌组织中病毒载量和病毒复制都有显著下降。由于CVB3感染引起的对心肌组织的炎症反应的特异性免疫应答，是其发病的重要机制之一。研究认为Th17细胞和Treg细胞在病毒性心肌炎中扮演中重要免疫调节作用，在我们的实验中，感染CVB3后第七天的小鼠体内，过表达IL-35抑制了脾脏Th17细胞及其相关细胞因子的表达，而对Treg细胞表达没有显著影响；心脏中Th17相关促炎细胞因子TNF-α、IL-17A、IL-6表达与对照组相比，均有显著下调。综上所述，本研究首次在CVB3诱导的病毒性心肌炎模型中动态检测心肌组织中IL-35的表达情况，发现在心肌炎症高峰期IL-35下调表达，并且IL-35表达与病毒性心肌炎发病呈负相关；过表达IL-35对病毒性心肌炎具有保护作用，其机制可能是通过抑制Th17细胞及其心肌组织中相关促炎细胞因子的表达。本研究阐述了IL-35在病毒性心肌炎发病过程中的作用，不仅为病毒性心肌炎的的发病机制研究提供线索，而且为病毒性心肌炎的治疗预后提供一种新型策略和途径。