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早老性痴呆(Alzheimer′s disease，AD)是以进行性记忆丢失和认知能力下降为特征的神经退行性疾病。主要病理特征是选择性的神经元突触损伤、神经纤维缠绕(neurofibrillary tangle，NFT)和老年斑(senile plaques，SP)。β-淀粉样蛋白(Amyloidβ-peptide，Aβ)是构成老年斑或淀粉样斑块的主要成份，在AD的发病和进展中起关键作用。糖皮质激素(glucocorticoids，GCs)是由肾上腺皮质束状带合成和分泌的类固醇激素，是临床上应用最为广泛的激素类药物。海马是与学习记忆、行为和情绪密切相关的重要脑区，是GCs最为敏感的神经靶位。体内高水平GCs可透过血脑屏障进入脑组织，引起海马突触丢失、海马萎缩，加重海马齿状回神经元凋亡。因此，地塞米松(Dexamethasone，DEX)是否加重Aβ的神经元毒性作用有待研究。
目的
在体外实验条件下，观察DEX，Ap及其联合作用对海马神经元的影响，以探讨GCs是否加重Aβ的神经元毒性作用。
方法
取孕 18 天Sprague Dawley(SD)大鼠胚胎的海马神经元进行体外原代分离培养，于联合实验中先加入10μM DEX作用24h后，再加入5μM Aβ<,25-35>作用24h后观察损伤情况。应用MTT法进行细胞活力分析；运用 TUNEL 法检测海马神经元的凋亡情况，观察其凋亡特征：通过检测神经元胞内 Ca<2+>浓度、核NF-κB蛋白水平，探讨DEX是虿通过促进海马神经元胞内 Ca<2+>和/或抑制核NF-κB蛋白量来促进Aβ的神经元毒性；通过检测海马神经元p-tau蛋白含量，进一步探讨DEX是否通过提高p-tau水平促进Aβ的神经元毒性作用；通过检测海马神经元的p53蛋白质水平，拟探讨海马神经元的凋亡途径。
结果
1．细胞活力检测发现(MTT 法)，DEX(0．01μM～10 μM)和Aβ<,25-35>(1，5μM)对培养的海马神经元活性没有影响(P>0．05)，但DEX(1，10μM)作用24h后，再和Aβ<,25-35>(1μM，5μM)孵育24h，吸光度(A值)明显降低(P<0．05)，且呈剂量依赖性。
2．TUNEL法检测10μM DEX和5μM Aβ<,25-35>作用海马神经元时，TUNEL染色的阳性细胞增加不明显(P>0.05)，但经10μM DEX作用24h后，再和5μM Aβ<,25-35>孵育24h，凋亡率明显增加，与同剂量的DEX和Aβ<,25-35>相比，差异有显著性(P<0.05)。
3． 10μM DEX作用海马神经元24h，激光共聚焦显微镜检测神经元胞内Ca<2+>水平没有增加(P>0.05)，5μM Aβ<,25-35>处理的神经元，胞内 Ca<2+>有轻微的升高(P<0.05)，但10μM DEX作用海马神经元24h后，再加入5μM Aβ<,25-35>作用60min，与同剂量的Aβ<,25-35>相比，胞内Ca<2+>浓度明显增加(P<0.05)。
4．Aβ可剂量依赖性地引起神经元核NF-κB蛋白增加。与对照组(0μM Aβ，0μMDEX)相比，10μM DEX使神经元核NF-κB表达量减少，5μM Aβ<,25-35>能够增加核NF-κB表达量，与同剂量的AB相比，DEX+Aβ<,25-35>组的核NF-κB表达量有显著性差异(P<0.05)。此外，与对照组相比，5μM Aβ<,25-35>作用海马神经元时，胞浆NF-κB和IκBα表达量降低(P<0.05)，DEX组的胞浆NF-κB和IκBα表达量增加(P<0.05)，但与同剂量的Aβ组相比，DEX+Aβ<,25-35>组的胞浆NF-κB和IκBα表达量，有显著性差异(P<0.05)。
5．与对照组(0μMAp，0μDEX)相比，10μM DEX不能增加p53蛋白量(P>0.05)，5μM Aβ<,25-35>组的p53蛋白量增加明显(P<0.05)，DEX+Aβ<,25-35>的p53蛋白表达量与同剂量Aβ<,25-35>组相比，差异没有显著性(P<0.05)。
6．Aβ<,25-35>能够呈剂量依赖性的增加海马神经元 p-tau-Thr231 表达量。与对照组(0μM Aβ，0μM DEX)相比，10μM DEX作用海马神经元亦能增加p-tau-Thr231的水平，但与同剂量DEX和Aβ<,25-35>组相比，10μM DEX+1μM Aβ<,25-35>组。
结论
DEX可明显促进Aβ的神经元毒性作用，DEX可能通过促进Aβ引起海马神经元胞内Ca<2+>升高、抑制核NF-κB蛋白水平来增加神经元毒性：DEX可能通过促进Aβ引起tau高度磷酸化诱导神经毒性作用；DEX促进Aβ引起神经元的凋亡可能不通过p53途径。从而提示DEX可能促进Aβ引起神经元胞内Ca<2+>和p-tau蛋白水平的升高或/和抑制核NF-κB蛋白水平来加重神经元毒性作用。