论文部分内容阅读
苹果轮纹病(Botrycsphaeria berengeriana de Not.f.sp..piricola(Nose)koganezawa etSakuma)与苹果腐烂病和早期落叶病是我国苹果的三大主要病害。苹果轮纹病主要危害苹果枝干和果实。随着公众对化学药剂污染环境的关注,迫切要求通过非化学药剂的手段控制苹果轮纹病病害,迫切需要抗轮纹病品种。因此寻找与苹果抗轮纹病基因紧密连锁的分子标记,在生产实践中用以辅助早期选择,能大大缩短育种周期,极大地提高选择效率。
本研究以“红玉×金冠”的5年生杂种实生树为试材,依据苹果枝干轮纹病田间自然发病抗病性分离情况构建分离群体,应用SSR和AFLP技术筛选与苹果枝干抗轮纹病性状紧密连锁的分子标记。
结果如下:结合SSR分子标记技术和BSA(Bulk Segregant Analysis),对抗感池和分离群体进行验证,从140对SSR引物中发现有5对引物具有多态性。其中引物CH02a04在抗病单株上的交换率最低,为6.5％,扩增出一条450bp的条带,作为与苹果枝干抗轮纹病性状紧密连锁的分子标记。遗传距离估算值为5.1cM。通过该SSR标记,苹果抗轮纹病基因定位于苹果第2条或第7条染色体上。AFLP分子标记结果表明,在所筛选的256个AFLP引物组合中,住抗感池间有多态性的引物组合共有12个,其中E-AG/M-GAC和E-AGG/M-CTT在抗病单株上的交换率最低,分别为6.5％利8.0％,分别扩增出280bp和110bp的条带。可以作为与苹果枝干抗轮纹病基因连锁的分子标记,遗传距离分别为5.1cM和6.2cM.。为了方便在分子标记辅助育种实践中的使有,还将AFLP中的E-AG/M-GAC标记转化成了SCAR标记。回收了与苹果抗轮纹病基因连锁的多态性条带,将其中的E-AG/M-GAC成功转化为SCAR(Sequence Characterized Amplified Region)标记。
通过进行群体分析,证明该SCAR标记特征带与原AFLP标记表现一致。为了验证所得的分子标记的可行性,对同一杂种群体5个轮纹病菌株接种鉴定表现为高抗、高感的单株分别用SCAR和SSR标记进行了水平抗病性的验证和垂直抗病性的验证,结果表明分子标记的可信度为75％~85％。
本研究以“红玉×金冠”的5年生杂种实生树为试材,依据苹果枝干轮纹病田间自然发病抗病性分离情况构建分离群体,应用SSR和AFLP技术筛选与苹果枝干抗轮纹病性状紧密连锁的分子标记。
结果如下:结合SSR分子标记技术和BSA(Bulk Segregant Analysis),对抗感池和分离群体进行验证,从140对SSR引物中发现有5对引物具有多态性。其中引物CH02a04在抗病单株上的交换率最低,为6.5％,扩增出一条450bp的条带,作为与苹果枝干抗轮纹病性状紧密连锁的分子标记。遗传距离估算值为5.1cM。通过该SSR标记,苹果抗轮纹病基因定位于苹果第2条或第7条染色体上。AFLP分子标记结果表明,在所筛选的256个AFLP引物组合中,住抗感池间有多态性的引物组合共有12个,其中E-AG/M-GAC和E-AGG/M-CTT在抗病单株上的交换率最低,分别为6.5％利8.0％,分别扩增出280bp和110bp的条带。可以作为与苹果枝干抗轮纹病基因连锁的分子标记,遗传距离分别为5.1cM和6.2cM.。为了方便在分子标记辅助育种实践中的使有,还将AFLP中的E-AG/M-GAC标记转化成了SCAR标记。回收了与苹果抗轮纹病基因连锁的多态性条带,将其中的E-AG/M-GAC成功转化为SCAR(Sequence Characterized Amplified Region)标记。
通过进行群体分析,证明该SCAR标记特征带与原AFLP标记表现一致。为了验证所得的分子标记的可行性,对同一杂种群体5个轮纹病菌株接种鉴定表现为高抗、高感的单株分别用SCAR和SSR标记进行了水平抗病性的验证和垂直抗病性的验证,结果表明分子标记的可信度为75％~85％。