【摘 要】
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研究背景： 细胞套叠结构（cell-in-cell structure，CIC structure）时发生在多个生命过程中的细胞学现象。近年来，关于乳腺癌细胞套叠结构的研究发现，其发生率与乳腺癌的预后成正
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研究背景： 细胞套叠结构（cell-in-cell structure，CIC structure）时发生在多个生命过程中的细胞学现象。近年来，关于乳腺癌细胞套叠结构的研究发现，其发生率与乳腺癌的预后成正相关的，然而其作用机制仍旧不十分清楚。目前认为，乳腺癌同质细胞套叠结构的潜在机制是套叠死亡(entosis)，套叠死亡主要是通过细胞粘附和Rho活性发挥作用的。然而，我们通过对不同CIC形成率的单克隆细胞株进行芯片检测发现，RRAGD与CIC的形成可能具有相关性。 Ras相关GTP结合蛋白D(Ras-related GTP Binding Protein D，RRAGD)是一类分布在多个组织中的GTP结合蛋白，其由位于目前认为RRAGD主要与调节哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合体1(mammalian target of rapamycin complex1，mTORCl)，参与细胞的多种生命过程，特别是在肿瘤当中常见mTOR的过度激活。因此，研究RRAGD基因对乳腺癌CIC结构形成，可以为我们认识乳腺癌的发生发展提供新的思路。 目的： 研究RRAGD基因调节乳腺癌细胞cell-in-cell结构形成的机制 方法： 1、观察乳腺癌细胞MDA-MB-436细胞不同单克隆的细胞形态，统计其CIC形成率; 2、利用real-time PCR验证芯片结果; 3、设计合成靶向RRAGD的siRNA，瞬时转染乳腺癌细胞系，观察细胞形态变化，比较CIC形成率，; 4、构建靶向RRAGD的shRNA，获得稳定敲低的乳腺癌细胞系，比较CIC形成率; 5、构建过表达RRAGD逆转录表达载体，转染获得稳定过表达的乳腺癌细胞系，比较CIC形成率，活细胞观察RRAGD的表达分布。 结果： 1、CIC形成率高的乳腺癌单克隆细胞细胞宽大、单薄，形成率低的乳腺癌细胞细胞扁平、紧密; 2、芯片结果正确; 3、抑制RRAGD的表达，乳腺癌细胞CIC形成率下降; 4、过表达RRAGD，乳腺癌细胞CIC形成率上升。活细胞观察知，在cell-in-cell结构里，当内部细胞死亡后，RRAGD聚集在液泡周围，反之，RRAGD不聚集。 结论： RRAGD基因可以调节能够提高乳腺癌细胞系CIC结构的形成，并且可能通过调节mTORC1，参与外部细胞液泡晚期成熟的过程。
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