【摘 要】
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溶原性噬菌体在乳杆菌菌株中分布广泛,具有一定的隐蔽性,难以发现,一旦被诱导变为烈性噬菌体,则可能导致发酵失败,造成经济损失。因此,本课题以发酵粘液乳杆菌IMAU32579为研究对象,通过丝裂霉素C诱导获得发酵粘液乳杆菌噬菌体,对其耐受能力、吸附特性、灭活条件、全基因组序列等进行研究,可为了解乳杆菌噬菌体生物学特性,构建噬菌体防控措施提供数据和理论支持。结果表明:(1)发酵粘液乳杆菌IMAU3257
【基金项目】
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国家自然科学基金(项目编号32160550,31760447,31301517); 中央引导地方科技发展资金(项目编号2021ZY0022); 内蒙古自然科学基金(项目编号2021MS03014,2019BS03003);
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溶原性噬菌体在乳杆菌菌株中分布广泛,具有一定的隐蔽性,难以发现,一旦被诱导变为烈性噬菌体,则可能导致发酵失败,造成经济损失。因此,本课题以发酵粘液乳杆菌IMAU32579为研究对象,通过丝裂霉素C诱导获得发酵粘液乳杆菌噬菌体,对其耐受能力、吸附特性、灭活条件、全基因组序列等进行研究,可为了解乳杆菌噬菌体生物学特性,构建噬菌体防控措施提供数据和理论支持。结果表明:(1)发酵粘液乳杆菌IMAU32579经1.9μg/m L的丝裂霉素C诱导后,成功获得1株发酵粘液乳杆菌噬菌体,命名为LFP-VB1。通过透射电子显微镜观察,该噬菌体头部直径为62.86±2.01 nm,尾为非收缩性尾,尾长为259.26±2.00 nm,直径为12.52±2.01 nm,属于长尾噬菌体科。该噬菌体的最佳感染复数为0.01,潜伏期为30min,裂解期为60 min,裂解量为148.03±2.65 PFU/m L。(2)温度和p H值对噬菌体LFP-VB1的存活率影响明显。当温度上升至50℃处理30 min后,存活率降为78.36%;p H值为2时,则可使其在30 min内完全失活。(3)温度、p H值、钙、镁离子和氯霉素对噬菌体LFP-VB1的吸附影响不明显。在各温度条件下(0、10、20、30、37、42、50℃),噬菌体的吸附率均可达到90%以上;在p H4~11范围内,噬菌体吸附率可保持95%以上。是否添加钙、镁离子或氯霉素对其吸附能力无明显影响。(4)利用乙醇、次氯酸钠溶液处理该噬菌体60 min,均不能使其完全失活。75%乙醇、800 mg/L次氯酸钠处理60 min,可使其分别下降4.71、6.29个对数级。噬菌体LFP-VB1对高温极敏感。63℃处理4 min即可完全失活。(5)噬菌体LFP-VB1的基因组为双链DNA,长度为43789 bp,G+C含量为46.06%,有53个蛋白编码区。与NCBI数据库中已发表的3株发酵粘液乳杆菌噬菌体(LF1、phi PYB5和JNU_P5)进行共线性分析显示,噬菌体LFP-VB1存在染色体缺失、插入和倒置的现象。
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