【摘 要】
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旋毛虫病是一种严重的人兽共患寄生虫病.作者于1999-2001年以旋毛虫成囊前期幼虫为实验材料、以31kDa结构基因为研究对象进行了旋毛虫基因重组抗原的制备及其特性的初步研究.
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旋毛虫病是一种严重的人兽共患寄生虫病.作者于1999-2001年以旋毛虫成囊前期幼虫为实验材料、以31kDa结构基因为研究对象进行了旋毛虫基因重组抗原的制备及其特性的初步研究.为了研制出能够于用旋毛虫病早期免疫学诊断且具有高度敏感性和特异性的旋毛虫基因重组抗原,作者首先用改良贝氏法收集旋毛虫成囊前期活幼虫,然后提取其总RNA.根据编码旋毛虫成囊期幼早31kDa蛋白的结构基因序列,制备PEL31kDa的重组抗原.经过测序的目的基因TSPG-2亚克隆入表达载体pGEMEX-1中,所得重组表达载体转化大肠杆菌JM109DE<,3>,筛选阳性克隆经酶切鉴定并传代培养纯化.测序确证后将所得工程菌通过IPTG刺激培养,取不同时间培养物裂解液进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,染色后进行薄层凝胶光密度扫描测定目的的蛋白表达量,同时对表达产物进行了Western-blot检测.研究结果表明,旋毛虫31kDa抗蛋白在成囊前期幼虫已有表达.通过基因工程方法在体外表达出含旋毛虫成囊前期幼虫31kDa的重组融合蛋白.经Western-blot检测感染旋毛虫的大鼠血清表明该重组蛋白具有较好的抗原性,提示该重组蛋白可作为一种早期诊断抗原,在旋毛虫病的早期免疫学诊断和免疫预防方面具有潜在应用价值.
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