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目的:经尾静脉注入编码HSV-1 gB的pDNA转染给小鼠,以此来验证水动力学注射接种法DNA疫苗提高转基因有效表达,基因疫苗治疗感染性疾病的有效性,分析基因疫苗诱导的抗病毒免疫反应。 方法:采用血管内注射方法,将含有不同剂量、不同pDNAs的生理盐水注入Balb/c小鼠体内,一周后再次免疫。观察不同组合pDNA进行免疫的实验组和对照组动物受到致死剂量HSV-Ⅰ感染后生存率差异。通过潜伏感染的检测,血清中细胞因子浓度的测定,细胞毒毒性反应的测定以及中和实验来评价免疫效果。 结果: 1.接种HSV-1 gB表达质粒(pG.gB)的小鼠,与对照组相比,5μg pG.gB免疫组生存率显著提高;5μg免疫组与3μg和1μg的pG.gB免疫组生存率相比较,存在显著差异。 2.接种含有EBNA1基因和orip序列的HSV-1 gB表达质粒(pGEG.gB)的小鼠,与对照组相比,5μg pG.gB免疫组生存率显著提高;5μg免疫组与3μg和1μg的pG.gB免疫组生存率相比较,亦存在显著差异,但是与pG.gB免疫组比较生存率无显著差异。 3.与对照组相比,5μg的pG.gB或pGEG.gB诱导产生中和抗体的效价有显著差异。在给予1μg pG.gB或 pGEG.gB同样显示了对 HSV-1斑块形成的抑制作用,但是抑制率明显低于给予5μg pDNAs组。 4.与同样的效应细胞相比,5μg的pGEG.gB免疫组对P815.gB细胞有显著的细胞毒性作用,1μg pGEG.gB免疫的小鼠并没有显示对P815.gB杀伤活性的显著增加。脾细胞增殖实验结果显示,pGEG.gB-免疫小鼠的脾细胞增殖反应显著高于pG.gB免疫的小鼠。 5.应用ELISA法分析,与对照组相比pG.gB和 pGEG.gB免疫后的小鼠血清中IL-12和IFN-γ浓度均显著升高。但是不同剂量的各实验组的IL-12和IFN-γ浓度无显著差异。 结论: 1.水流动力学注射方法是一种简便、有效的体内gB基因转移方式。 2.裸pDNA的经尾静脉免疫可以诱导HSV-1感染小鼠的体液和细胞免疫应答,对小鼠HSV-1急性感染有明显的预防和治疗作用。 3.含有EBNA1和oriP的EBV质粒载体明显增强了CTL活性和增殖反应。