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目的：观察M2型巨噬细胞、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9， MMP-9)和局部微血管在不同级别湿热下注型宫颈病变中的表达和关系，探讨湿热下注型宫颈鳞状上皮内病变突破细胞外基质屏障发展为宫颈癌的理论机制；根据湿热下注型宫颈病变发展过程中相关标志物变化的趋势，从分子生物学角度验证中医学―治未病‖思想的理论价值；并探究中药制剂派特灵对湿热下注型低度鳞状上皮内病变(low-grade squamous intraepithelial lesion, LSIL)患者M2型巨噬细胞、MMP-9、微血管的干预及其对抗高危型人乳头瘤病毒(high-risk human papillomavirus, HR-HPV)感染、促进宫颈病灶消退的作用，试图从微观角度寻找清热利湿解毒疗法治疗宫颈病变的分子靶标。
方法：研究(一)：选择湿热下注型LSIL、高度鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesion, HSIL)和子宫颈癌(cervical cancer, CC)患者各30例，另选取20例因子宫肌瘤行全子宫切除术、宫颈液基薄层细胞学检测(thinprep cytologic test, TCT)、HPV检查正常的患者为研究对象，PCR方法观察各组患者宫颈脱落细胞iNOS、Arg-1、MMP-9、VEGF-AmRNA的表达情况；CC组(宫颈癌患者)中宫颈脱落细胞Arg-1、MMP-9、VEGF-A之间的关系；WesternBlot方法观察CC组和control组(TCT和HPV正常患者)宫颈组织中MMP-9、VEGF-A的表达情况；应用免疫荧光技术观察CC组和control组CD163、MMP-9、CD34的表达情况进一步验证M2型巨噬细胞、MMP-9、微血管在正常宫颈和湿热下注型宫颈癌组织中的差异性；通过观察CC组CD163、MMP-9定位情况验证M2型巨噬细胞和MMP-9两者之间的关系。研究(二)：将湿热下注型HR-HPV感染的LSIL患者66例，按照随机数字表法分到中药(派特灵治疗)组和对照组，每组33例。观察中药制剂派特灵治疗后两组患者宫颈病灶消退率、HR-HPV转阴率、中医证候疗效；治疗后两组患者宫颈脱落细胞iNOS、Arg-1、MMP-9、VEGF-A表达水平差异。
结果：研究(一)：随着湿热下注型宫颈病变的进展，宫颈脱落细胞Arg-1、MMP-9、VEGF-AmRNA表达显著升高(P＜0.05)，iNOSmRNA分子表达显著降低(P＜0.05)。CC组Arg-1与MMP-9mRNA表达呈正相关；MMP-9与VEGF-AmRNA表达呈正相关(P＜0.001)；CC组MMP-9和VEGF-A蛋白表达显著高于control组(P＜0.05)；湿热下注型宫颈癌组织中CD163、MMP-9、CD34表达显著高于正常宫颈组织；免疫荧光分析显示湿热下注型宫颈癌组织中CD163和MMP-9存在共定位关系。研究(二)：治疗后，中药组中医证候疗效总有效率为80.64%、对照组为48.48%，中药组显著优于对照组(P＜0.01)；与对照组比较，经派特灵治疗后中药组宫颈病灶消退率显著增高(P＜0.001)；中药组HR-HPV转阴率显著高于对照组(P＜0.001)；经派特灵治疗后，中药组较对照组宫颈脱落细胞Arg-1、MMP-9、VEGF-AmRNA表达显著下调(P＜0.01)，iNOSmRNA分子表达显著上调(P＜0.05)。
结论：1.M2型巨噬细胞浸润、MMP-9分泌增加、病变周围微血管分布增加是湿热下注型宫颈病变进展的危险因素，在―HR-HPV感染-LSIL-HSIL-宫颈癌‖的进展过程中，M2型巨噬细胞可能通过调节MMP-9加速宫颈局部血管的生长，参与病理性组织重塑，影响疾病进展。根据湿热下注型宫颈病变进展过程中相关标志物变化的趋势，从分子生物学角度验证了中医学―治未病‖思想的理论价值。2.中药制剂派特灵可明显改善HR-HPV感染的湿热下注型LSIL患者的中医临床症状，加快HR-HPV的清除，缩短HR-HPV感染时间，促进宫颈病灶消退，说明清热利湿解毒疗法具有抗HPV感染的作用。3.派特灵可能是通过抑制M2型巨噬细胞，下调破环基底膜的MMP-9分泌，抑制病变细胞周围血管密度增加，进而加快HR-HPV的清除，促进宫颈病灶消退，治疗LSIL。从微观层面解释了清热利湿解毒中药治疗宫颈病变的作用靶点，丰富了中医证候客观化理论。
方法：研究(一)：选择湿热下注型LSIL、高度鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesion, HSIL)和子宫颈癌(cervical cancer, CC)患者各30例，另选取20例因子宫肌瘤行全子宫切除术、宫颈液基薄层细胞学检测(thinprep cytologic test, TCT)、HPV检查正常的患者为研究对象，PCR方法观察各组患者宫颈脱落细胞iNOS、Arg-1、MMP-9、VEGF-AmRNA的表达情况；CC组(宫颈癌患者)中宫颈脱落细胞Arg-1、MMP-9、VEGF-A之间的关系；WesternBlot方法观察CC组和control组(TCT和HPV正常患者)宫颈组织中MMP-9、VEGF-A的表达情况；应用免疫荧光技术观察CC组和control组CD163、MMP-9、CD34的表达情况进一步验证M2型巨噬细胞、MMP-9、微血管在正常宫颈和湿热下注型宫颈癌组织中的差异性；通过观察CC组CD163、MMP-9定位情况验证M2型巨噬细胞和MMP-9两者之间的关系。研究(二)：将湿热下注型HR-HPV感染的LSIL患者66例，按照随机数字表法分到中药(派特灵治疗)组和对照组，每组33例。观察中药制剂派特灵治疗后两组患者宫颈病灶消退率、HR-HPV转阴率、中医证候疗效；治疗后两组患者宫颈脱落细胞iNOS、Arg-1、MMP-9、VEGF-A表达水平差异。
结果：研究(一)：随着湿热下注型宫颈病变的进展，宫颈脱落细胞Arg-1、MMP-9、VEGF-AmRNA表达显著升高(P＜0.05)，iNOSmRNA分子表达显著降低(P＜0.05)。CC组Arg-1与MMP-9mRNA表达呈正相关；MMP-9与VEGF-AmRNA表达呈正相关(P＜0.001)；CC组MMP-9和VEGF-A蛋白表达显著高于control组(P＜0.05)；湿热下注型宫颈癌组织中CD163、MMP-9、CD34表达显著高于正常宫颈组织；免疫荧光分析显示湿热下注型宫颈癌组织中CD163和MMP-9存在共定位关系。研究(二)：治疗后，中药组中医证候疗效总有效率为80.64%、对照组为48.48%，中药组显著优于对照组(P＜0.01)；与对照组比较，经派特灵治疗后中药组宫颈病灶消退率显著增高(P＜0.001)；中药组HR-HPV转阴率显著高于对照组(P＜0.001)；经派特灵治疗后，中药组较对照组宫颈脱落细胞Arg-1、MMP-9、VEGF-AmRNA表达显著下调(P＜0.01)，iNOSmRNA分子表达显著上调(P＜0.05)。
结论：1.M2型巨噬细胞浸润、MMP-9分泌增加、病变周围微血管分布增加是湿热下注型宫颈病变进展的危险因素，在―HR-HPV感染-LSIL-HSIL-宫颈癌‖的进展过程中，M2型巨噬细胞可能通过调节MMP-9加速宫颈局部血管的生长，参与病理性组织重塑，影响疾病进展。根据湿热下注型宫颈病变进展过程中相关标志物变化的趋势，从分子生物学角度验证了中医学―治未病‖思想的理论价值。2.中药制剂派特灵可明显改善HR-HPV感染的湿热下注型LSIL患者的中医临床症状，加快HR-HPV的清除，缩短HR-HPV感染时间，促进宫颈病灶消退，说明清热利湿解毒疗法具有抗HPV感染的作用。3.派特灵可能是通过抑制M2型巨噬细胞，下调破环基底膜的MMP-9分泌，抑制病变细胞周围血管密度增加，进而加快HR-HPV的清除，促进宫颈病灶消退，治疗LSIL。从微观层面解释了清热利湿解毒中药治疗宫颈病变的作用靶点，丰富了中医证候客观化理论。