【摘 要】
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该研究首次扩增出中国登革2型病毒（D2-43株）,3型病毒（D3-80-2）和4型病毒（D4-B5）株基因组全长cDNA分子,长约11kb,与预期大小一致.为鉴定扩增产物的正确性,重新设计了新引物,以扩增的
【出 处】
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中国人民解放军军事医学科学院 解放军军事医学科学院
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该研究首次扩增出中国登革2型病毒（D2-43株）,3型病毒（D3-80-2）和4型病毒（D4-B5）株基因组全长cDNA分子,长约11kb,与预期大小一致.为鉴定扩增产物的正确性,重新设计了新引物,以扩增的全长cDNA分子为模板,分别扩增基本覆盖登革2.3.4型病毒基因组全长的cDNA片段,大小在800-2400bp之间,以对其进行初步鉴定.结果表明能够扩增出与预期大小一致的片段.将含复杂二级结构的扩增片段回收后,克隆到pGEM-T载体进行序列分析.表明扩增产物为中国登革2,3,4型病毒所特有.经过初步的PCR鉴定后,该文又将cDNA进行了转录,并对转录产物的感染性进行了研究.利用特殊设计的引物,在全长cDNA序列上引入了SP6RNA聚合酶启动子的核心序列,以扩增的病毒全长cDNA分子为模板.在SP6RNA聚合酶作用下进行体外转录,获得了微克级的病毒转录体RNA,并具有很好的重复性.转录产物可被RNA酶降解,证明它确为RNA.
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